中文摘要 | 第3-6页 |
英文摘要 | 第6-9页 |
1 绪论 | 第18-34页 |
1.1 问题的提出及研究意义 | 第18-19页 |
1.2 国内外相关领域的研究现状 | 第19-30页 |
1.2.1 骨的形态发生、生长和重塑 | 第20-21页 |
1.2.2 骨的基本特征 | 第21-22页 |
1.2.3 骨组织的结构组成 | 第22-23页 |
1.2.4 骨组织中的细胞 | 第23-24页 |
1.2.5 骨损伤的修复过程 | 第24-26页 |
1.2.6 骨损伤修复与血管化 | 第26页 |
1.2.7 钛-骨组织整合修复早期失败的主要因素 | 第26-27页 |
1.2.8 氧化应激与骨损伤修复 | 第27-28页 |
1.2.9 钛材表面层层组装改性的研究现状 | 第28-30页 |
1.3 研究思路及主要研究内容 | 第30-31页 |
1.3.1 本文研究思路 | 第30-31页 |
1.3.2 本文研究的主要内容 | 第31页 |
1.4 本文的创新点 | 第31-34页 |
2 基于儿茶酚-壳聚糖(Chi-C)多层结构的构建及其促骨修复研究 | 第34-64页 |
2.1 前言 | 第34页 |
2.2 实验部分 | 第34-44页 |
2.2.1 主要实验设备 | 第34-35页 |
2.2.2 主要实验药品及试剂 | 第35-36页 |
2.2.3 其他 | 第36页 |
2.2.4 材料的制备与表征 | 第36页 |
2.2.5 多层膜的构建与表征 | 第36-37页 |
2.2.6 成骨细胞的分离培养与鉴定 | 第37页 |
2.2.7 细胞活死染色和MTT检测 | 第37-38页 |
2.2.8 细胞形态观察 | 第38页 |
2.2.9 ALP染色和活性检测 | 第38-40页 |
2.2.10 天狼猩红染色和胶原分泌定量检测 | 第40页 |
2.2.11 茜素红染色和细胞矿化定量检测 | 第40-41页 |
2.2.12 总RNA的提取 | 第41-42页 |
2.2.13 qRT-PCR检测 | 第42页 |
2.2.14 动物手术及影像学评价; | 第42-43页 |
2.2.15 病理染色与组织形态学统计 | 第43-44页 |
2.2.16 血管密度计算 | 第44页 |
2.2.17 统计学分析 | 第44页 |
2.3 结果与讨论 | 第44-62页 |
2.3.1 多层膜的制备与表征 | 第44-47页 |
2.3.2 成骨细胞的粘附铺展与增殖评价 | 第47-50页 |
2.3.3 成骨细胞的分化 | 第50-56页 |
2.3.4 体内成骨特性和骨修复 | 第56-62页 |
2.4 本章小结 | 第62-64页 |
3 Chi-C多层膜结构的抗氧化保护作用和机制研究 | 第64-80页 |
3.1 前言 | 第64页 |
3.2 实验部分 | 第64-68页 |
3.2.1 主要实验设备 | 第64-65页 |
3.2.2 主要实验药品及试剂 | 第65页 |
3.2.3 其他 | 第65页 |
3.2.4 氧化应激模型构建的H2O2浓度筛选 | 第65-66页 |
3.2.5 早期细胞粘附 | 第66页 |
3.2.6 胞内ROS检测: | 第66页 |
3.2.7 粘附基因的qRT-PCR检测 | 第66-67页 |
3.2.8 Western blotting检测 | 第67页 |
3.2.9 Chi-C的体内抗氧化特性研究 | 第67页 |
3.2.10 统计学分析 | 第67-68页 |
3.3 结果与讨论 | 第68-77页 |
3.3.1 Chi-C多层膜结构对细胞早期粘附的保护作用 | 第68-72页 |
3.3.2 Chi-C多层膜结构对细胞内ROS的清除能力 | 第72-73页 |
3.3.3 Chi-C多层膜结构的抗氧化保护作用分子机制 | 第73-77页 |
3.4 本章小结 | 第77-80页 |
4 钛基材表面成骨化和成血管化共调控的体外实验研究 | 第80-106页 |
4.1 前言 | 第80页 |
4.2 实验部分 | 第80-90页 |
4.2.1 主要实验设备 | 第80-81页 |
4.2.2 主要实验药品及试剂 | 第81-82页 |
4.2.3 其他 | 第82页 |
4.2.4 白色脂肪间充质干细胞(Ad-MSC)分离、培养与鉴定 | 第82-83页 |
4.2.5 早期细胞粘附 | 第83页 |
4.2.6 细胞骨架染色观察 | 第83页 |
4.2.7 Ad-MSCs细胞免疫荧光染色 | 第83-84页 |
4.2.8 细胞划痕实验 | 第84页 |
4.2.9 EdU染色 | 第84-85页 |
4.2.10 ALP染色和活性检测 | 第85页 |
4.2.11 天狼猩红染色和胶原分泌定量检测 | 第85页 |
4.2.12 茜素红染色和细胞矿化定量检测 | 第85页 |
4.2.13 HUVECs在基底表面的粘附状态研究 | 第85-86页 |
4.2.14 HUVECs细胞划痕实验 | 第86页 |
4.2.15 qRT-PCR检测 | 第86页 |
4.2.16 ELISA检测 | 第86-87页 |
4.2.17 钛基材接种Ad-MSC对HUVEC细胞影响研究 | 第87-88页 |
4.2.18 钛基材接种HUVECs对Ad-MSC细胞影响研究 | 第88-89页 |
4.2.19 蛋白Western blotting检测 | 第89-90页 |
4.2.20 统计学分析 | 第90页 |
4.3 结果与讨论 | 第90-105页 |
4.3.1 Ad-MSC的原代分离培养、鉴定以及在钛基材表面的成骨分化特性 | 第90-95页 |
4.3.2 Ad-MSC的在钛基材表面粘附、铺展和迁移特性研究 | 第95-99页 |
4.3.3 HUVECs的在钛基材表面粘附、铺展和迁移特性研究 | 第99-101页 |
4.3.4 钛基材表面对内皮细胞和间充质干细胞相互作用的调控机制 | 第101-105页 |
4.4 本章小结 | 第105-106页 |
5 钛基材表面成骨化和成血管化共调控的体内实验研究 | 第106-120页 |
5.1 前言 | 第106页 |
5.2 实验部分 | 第106-109页 |
5.2.1 主要实验设备 | 第106页 |
5.2.2 主要实验药品及试剂 | 第106-107页 |
5.2.3 其他 | 第107页 |
5.2.4 动物手术; | 第107页 |
5.2.5 组织处理 | 第107-108页 |
5.2.6 H&E染色 | 第108页 |
5.2.7 Masson’s三色染色(Masson’s trichrome staining) | 第108页 |
5.2.8 免疫荧光染色 | 第108-109页 |
5.2.9 免疫组织化学染色: | 第109页 |
5.2.10 血管密度计算 | 第109页 |
5.2.11 统计学分析 | 第109页 |
5.3 结果与讨论 | 第109-117页 |
5.3.1 损伤修复部位的细胞增殖与干细胞募集 | 第109-112页 |
5.3.2 损伤修复部位的血管化水平 | 第112-115页 |
5.3.3 钛材界面的成骨评价 | 第115-117页 |
5.4 本章小结 | 第117-120页 |
6 结论及展望 | 第120-122页 |
6.1 结论 | 第120页 |
6.2 展望 | 第120-122页 |
致谢 | 第122-124页 |
参考文献 | 第124-138页 |
附录 | 第138-139页 |
A.作者在攻读博士学位期间科研及发表的论文 | 第138-139页 |
B.作者攻读学位期间参加的科研项目 | 第139页 |