| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-22页 |
| 1.1 青蛤的经济价值及相关研究背景 | 第14-15页 |
| 1.2 青蛤大规模死亡原因 | 第15-16页 |
| 1.3 鳗弧菌的治病机理和防治 | 第16-17页 |
| 1.3.1 鳗弧菌的致病机理 | 第16-17页 |
| 1.3.2 防治策略 | 第17页 |
| 1.4 贝类的免疫方式与过程 | 第17-19页 |
| 1.4.1 细胞免疫 | 第17-18页 |
| 1.4.2 体液免疫 | 第18-19页 |
| 1.5 丝氨酸蛋白酶抑制剂概述 | 第19-20页 |
| 1.6 研究目的、意义及创新点 | 第20-22页 |
| 1.6.1 研究目的 | 第20-21页 |
| 1.6.2 研究意义 | 第21页 |
| 1.6.3 研究创新点 | 第21-22页 |
| 第二章 青蛤SPI基因序列的克隆和结构分析 | 第22-32页 |
| 2.1 材料与方法 | 第22-23页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-24页 |
| 2.2.1 青蛤cDNA文库的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.2 青蛤SPI基因筛选及生物信息学分析 | 第24页 |
| 2.3 结果 | 第24-30页 |
| 2.3.1 青蛤SPI基因的结构特征 | 第24-26页 |
| 2.3.2 同源性分析 | 第26-27页 |
| 2.3.3 青蛤Kazal型SPI空间结构预测 | 第27-28页 |
| 2.3.4 青蛤Kazal型SPI基因系统学分析 | 第28-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 青蛤SPI基因的表达分析 | 第32-45页 |
| 3.1 实验材料 | 第32-34页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第32页 |
| 3.1.2 实验药品与试剂 | 第32-33页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第33页 |
| 3.1.4 药品配置 | 第33-34页 |
| 3.1.5 引物设计与合成 | 第34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-40页 |
| 3.2.1 青蛤SPI基因在组织间的表达 | 第34-38页 |
| 3.2.1.1 样品处理 | 第34-35页 |
| 3.2.1.2 青蛤总RNA的提取 | 第35-36页 |
| 3.2.1.3 cDNA模板第一链的合成 | 第36-37页 |
| 3.2.1.4 RT-PCR检测SPI基因在不同组织中的表达情况 | 第37-38页 |
| 3.2.1.5 数据分析 | 第38页 |
| 3.2.2 鳗弧菌侵染对青蛤SPI基因在血液中的表达分析 | 第38-40页 |
| 3.2.2.1 青蛤暂养和鳗弧菌侵染实验 | 第38-39页 |
| 3.2.2.2 mRNA提取及反转录 | 第39页 |
| 3.2.2.3 荧光定量PCR检测SPI基因的时序表达特征 | 第39页 |
| 3.2.2.4 数据分析 | 第39-40页 |
| 3.3 实验结果 | 第40-43页 |
| 3.3.1 青蛤总RNA的提取 | 第40页 |
| 3.3.2 cDNA第一链的合成 | 第40-41页 |
| 3.3.3 青蛤SPI基因在不同组织中的表达 | 第41-42页 |
| 3.3.4 青蛤SPI基因在血液中的时序性表达 | 第42-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 青蛤SPI基因的原核表达、纯化及复性 | 第45-61页 |
| 4.1 材料与方法 | 第45-50页 |
| 4.1.1 实验菌株与载体质粒 | 第45页 |
| 4.1.2 试剂 | 第45-49页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第49-50页 |
| 4.2 实验方法 | 第50-56页 |
| 4.2.1 青蛤SPI基因ORF的克隆 | 第50-52页 |
| 4.2.1.1 PCR扩增 | 第50-51页 |
| 4.2.1.2 连接 | 第51页 |
| 4.2.1.3 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第51页 |
| 4.2.1.4 转化 | 第51-52页 |
| 4.2.1.5 单克隆筛选及检测 | 第52页 |
| 4.2.2 SPI基因原核表达载体的构建 | 第52-54页 |
| 4.2.2.1 提取质粒 | 第52-53页 |
| 4.2.2.2. 双酶切 | 第53页 |
| 4.2.2.3. 连接 | 第53页 |
| 4.2.2.4. 转化 | 第53-54页 |
| 4.2.3 SPI基因重组蛋白的诱导表达 | 第54-55页 |
| 4.2.4 SPI基因重组蛋白的纯化与复性 | 第55-56页 |
| 4.3 实验结果 | 第56-59页 |
| 4.3.1 SPI基因开放阅读框的克隆 | 第56-57页 |
| 4.3.2 SPI基因重组载体构建 | 第57页 |
| 4.3.3 菌落PCR结果 | 第57-58页 |
| 4.3.4 重组蛋白的诱导表达 | 第58页 |
| 4.3.5 重组蛋白的纯化 | 第58-59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 青蛤SPI基因重组蛋白的活性分析 | 第61-70页 |
| 5.1 实验材料 | 第61-62页 |
| 5.1.1 菌株与蛋白 | 第61页 |
| 5.1.2 实验试剂与药品 | 第61页 |
| 5.1.3 仪器设备 | 第61-62页 |
| 5.2 实验方法 | 第62-64页 |
| 5.2.1 酶液蛋白含量测定 | 第62页 |
| 5.2.2 重组蛋白活力测定 | 第62-63页 |
| 5.2.3 重组蛋白体外抑菌活力分析 | 第63-64页 |
| 5.2.4 重组蛋白体内免疫调节功能研究 | 第64页 |
| 5.3 实验结果 | 第64-67页 |
| 5.3.1 酶液蛋白含量 | 第64页 |
| 5.3.2 重组蛋白活力分析 | 第64-65页 |
| 5.3.3 重组蛋白体外抑菌活性分析 | 第65-66页 |
| 5.3.4 重组蛋白体内免疫调节功能研究 | 第66-67页 |
| 5.4 讨论 | 第67-70页 |
| 初步结论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 附录 | 第80-81页 |
| 硕士期间发表和完成的文章 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
