| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-29页 |
| 1.1 骨形成及其调控 | 第12-19页 |
| 1.1.1 成骨细胞 | 第12-13页 |
| 1.1.2 骨形成 | 第13页 |
| 1.1.3 骨形成的过程 | 第13-14页 |
| 1.1.4 骨相关生长因子 | 第14-16页 |
| 1.1.5 骨相关转录因子 | 第16-17页 |
| 1.1.6 骨形成中表型分化 | 第17-19页 |
| 1.2 Gli基因 | 第19-26页 |
| 1.2.1 Hedgehog/Gli(Hh/Gli)信号通路 | 第19-21页 |
| 1.2.2 Gli家族 | 第21-22页 |
| 1.2.3 Gli3基因的结构和功能 | 第22-23页 |
| 1.2.4 Gli3基因与骨骼疾病 | 第23-24页 |
| 1.2.5 Gli3基因与骨代谢 | 第24-26页 |
| 1.3 MicroRNA143 | 第26-28页 |
| 1.4 本研究目的 | 第28-29页 |
| 第二章 Gli3在成骨分化中的表达研究 | 第29-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第29页 |
| 2.1.2 实验材料及试剂 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-34页 |
| 2.2.1 MC3T3-E1细胞的获取及培养 | 第30-31页 |
| 2.2.2 MC3T3-E1细胞的成骨诱导分化 | 第31页 |
| 2.2.3 RT-PCR检测Gli3及相关基因的表达 | 第31-34页 |
| 2.2.4 茜素红钙结节染色 | 第34页 |
| 2.2.5 数据处理分析 | 第34页 |
| 2.3 结果与分析 | 第34-37页 |
| 2.3.1 MC3T3-E1细胞的成骨诱导 | 第34-35页 |
| 2.3.2 基因表达分析 | 第35-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-41页 |
| 2.4.1 MC3T3-E1细胞的成骨诱导与基因表达 | 第37-39页 |
| 2.4.2 Gli3基因在成骨分化过程中的表达 | 第39-41页 |
| 第三章 Gli3干扰表达载体的构建以及干扰效果的检测 | 第41-57页 |
| 3.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 实验器材 | 第41页 |
| 3.1.2 实验材料与试剂 | 第41-42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-49页 |
| 3.2.1 发卡shRNA片段的设计与合成 | 第42-43页 |
| 3.2.2 载体的构建 | 第43-46页 |
| 3.2.3 重组质粒的鉴定 | 第46-47页 |
| 3.2.4 细胞转染及干扰效果检测 | 第47-48页 |
| 3.2.5 嘌呤霉素筛选稳定转染细胞株 | 第48-49页 |
| 3.3 结果与分析 | 第49-54页 |
| 3.3.1 双酶进行质粒鉴定 | 第49页 |
| 3.3.2 挑选阳性克隆及鉴定 | 第49-50页 |
| 3.3.3 测序鉴定连接质粒序列 | 第50页 |
| 3.3.4 转染细胞效果 | 第50-51页 |
| 3.3.5 RT-PCR检测Gli3干扰后的表达水平及干扰效果 | 第51-53页 |
| 3.3.6 嘌呤霉素筛选稳定转染细胞株 | 第53-54页 |
| 3.4 讨论 | 第54-57页 |
| 第四章 Gli3与MicroRNA143在SOSA-2中相互作用的研究 | 第57-63页 |
| 4.1 实验材料 | 第57页 |
| 4.1.1 实验器材 | 第57页 |
| 4.1.2 实验材料与试剂 | 第57页 |
| 4.2 实验方法 | 第57-59页 |
| 4.2.1 生物信息学预测 | 第57页 |
| 4.2.2 pCMV-miR143质粒扩大、提取及转染细胞SAOS-2 | 第57页 |
| 4.2.3 Gli3基因的检测 | 第57-59页 |
| 4.2.4 茜素红染色 | 第59页 |
| 4.3 结果与分析 | 第59-61页 |
| 4.3.1 生物信息学预测 | 第59-60页 |
| 4.3.2 重组质粒转染细胞对Gli3表达的影响 | 第60页 |
| 4.3.3 茜素红染色分析 | 第60-61页 |
| 4.4 讨论 | 第61-63页 |
| 第五章 结论与展望 | 第63-64页 |
| 5.1 结论 | 第63页 |
| 5.2 展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-73页 |
| 附录1：论文词汇中英文对照表 | 第73-74页 |
| 附录2：硕士在读期间学术成果 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
