| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 符号及缩略语 | 第12-13页 |
| 第一篇 文献综述 | 第13-29页 |
| 第一章 脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的毒性及脱毒 | 第13-29页 |
| 1 DON的产生与污染情况 | 第13-14页 |
| 2 DON的理化性质与代谢 | 第14-15页 |
| 3 DON的毒性作用 | 第15-18页 |
| 3.1 DON的急性毒性 | 第15-16页 |
| 3.2 DON的慢性毒性 | 第16-17页 |
| 3.3 DON的细胞毒性 | 第17-18页 |
| 3.4 DON的胚胎毒性、致癌性 | 第18页 |
| 3.5 DON与其它毒素的互作效应 | 第18页 |
| 4 DON在谷物与动物饲料中的限量标准 | 第18-20页 |
| 5 霉菌毒素的脱毒方法 | 第20-22页 |
| 5.1 物理脱毒法 | 第20-21页 |
| 5.2 化学脱毒法 | 第21页 |
| 5.3 营养解毒法 | 第21页 |
| 5.4 生物脱毒法 | 第21-22页 |
| 6 真菌毒素的预防 | 第22-23页 |
| 参考文献 | 第23-29页 |
| 第二篇 试验部分 | 第29-77页 |
| 第二章 NJA-1菌中DON降解酶基因的克隆与原核表达载体的构建 | 第29-51页 |
| 1 材料 | 第30-31页 |
| 1.1 菌种 | 第30页 |
| 1.2 主要材料与试剂 | 第30页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第30-31页 |
| 1.4 引物设计 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-40页 |
| 2.1 NJA-1菌的活化及扩增培养 | 第31-32页 |
| 2.2 NJA-1菌总RNA的提取 | 第32页 |
| 2.4 总RNA的变性琼脂糖凝胶电泳 | 第32-33页 |
| 2.5 RT-PCR体系 | 第33-34页 |
| 2.6 PCR产物的回收与纯化 | 第34-35页 |
| 2.7 pMD-EHa克隆载体的构建 | 第35-37页 |
| 2.8 pET-EHse表达载体的构建 | 第37-40页 |
| 3 结果 | 第40-47页 |
| 3.1 NJA-1菌中总RNA提取结果 | 第40页 |
| 3.2 RT-PCR结果分析 | 第40-41页 |
| 3.3 pMD-EHa大肠杆菌阳性克隆的筛选与鉴定 | 第41-43页 |
| 3.4 pMD-EHse大肠杆菌阳性克隆的筛选与鉴定 | 第43-46页 |
| 3.5 重组质粒pET-EHse转化宿主菌BL21的结果检测 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| 4.1 真菌RNA的提取 | 第47-48页 |
| 4.2 引物设计 | 第48-49页 |
| 4.3 大肠杆菌感受态的制备 | 第49页 |
| 4.4 阳性克隆的筛选 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-51页 |
| 第三章 融合蛋白sEH的表达及分析与纯化 | 第51-67页 |
| 1 材料 | 第51-52页 |
| 1.1 主要试剂 | 第51-52页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第52页 |
| 2 方法 | 第52-57页 |
| 2.1 融合蛋白sEH的诱导表达 | 第52-53页 |
| 2.2 融合蛋白sEH分析 | 第53-55页 |
| 2.3 融合蛋白sEH的纯化 | 第55-57页 |
| 3 结果 | 第57-60页 |
| 3.1 融合蛋白sEH的诱导表达结果 | 第57-58页 |
| 3.2 融合蛋白sEH分析结果 | 第58-59页 |
| 3.3 蛋白质纯化与含量测定结果 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| 4.1 融合蛋白sEH的表达 | 第60-61页 |
| 4.2 融合蛋白的可溶性 | 第61页 |
| 4.3 包涵体蛋白处理 | 第61-62页 |
| 4.4 蛋白纯化 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 第四章 融合蛋白sEH性质的初步研究 | 第67-77页 |
| 1 材料 | 第68页 |
| 1.1 主要试剂 | 第68页 |
| 1.2 主要仪器 | 第68页 |
| 2 方法 | 第68-70页 |
| 2.1 试剂的配制 | 第68页 |
| 2.2 苯基环氧乙烷检测方法的建立 | 第68-69页 |
| 2.3 融合蛋白的提取 | 第69页 |
| 2.4 酶标法测定酶活力 | 第69页 |
| 2.5 酶的pH稳定性 | 第69页 |
| 2.6 不同pH下反应对酶活的影响 | 第69页 |
| 2.7 酶的温度稳定性 | 第69页 |
| 2.8 不同反应温度对酶活的影响 | 第69-70页 |
| 2.9 有机溶剂对酶活的影响 | 第70页 |
| 2.10 金属离子对酶活的影响 | 第70页 |
| 3 结果 | 第70-75页 |
| 3.1 缩水甘油苯基醚浓度标准曲线 | 第70-71页 |
| 3.2 粗酶液活性与纯化后蛋白酶活性对比 | 第71页 |
| 3.3 酶的pH稳定性 | 第71-72页 |
| 3.4 不同pH下反应对酶活的影响 | 第72页 |
| 3.5 酶的温度稳定性 | 第72-73页 |
| 3.6 不同温度下反应对酶活的影响 | 第73页 |
| 3.7 有机溶剂对酶活的影响 | 第73-74页 |
| 3.8 金属离子对酶活的影响 | 第74-75页 |
| 4 讨论 | 第75页 |
| 参考文献 | 第75-77页 |
| 全文总结 | 第77-79页 |
| 附录 | 第79-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
