摘要 | 第4-5页 |
Abstract | 第5页 |
1 序言 | 第9-19页 |
1.1 红掌的研究进展 | 第9页 |
1.2 花青素的研究进展 | 第9-12页 |
1.2.1 花青素的生物合成途径 | 第9-11页 |
1.2.2 花青素基因工程概况 | 第11-12页 |
1.3 红掌花青素生物合成途径6个相关基因的研究 | 第12-14页 |
1.4 植物基因克隆技术分析 | 第14-16页 |
1.4.1 同源序列克隆 | 第15页 |
1.4.2 功能克隆 | 第15页 |
1.4.3 定位克隆 | 第15-16页 |
1.4.4 cDNA末端快速扩增技术 | 第16页 |
1.5 基因表达技术分析技术 | 第16-18页 |
1.5.1 Northern印迹 | 第17页 |
1.5.2 核糖核酸酶保护试验 | 第17-18页 |
1.5.3 RT-PCR | 第18页 |
1.6 本研究的意义 | 第18-19页 |
1.7 技术路线图 | 第19页 |
2 不同品种红掌颜色观察与比较 | 第19-21页 |
2.1 材料与方法 | 第19页 |
2.2 结果与分析 | 第19-20页 |
2.2.1 佛焰苞的比较 | 第19页 |
2.2.2 叶片的比较 | 第19-20页 |
2.3 小结 | 第20-21页 |
3 花青素含量的测定与比较 | 第21-22页 |
3.1 材料与方法 | 第21页 |
3.1.1 植物材料 | 第21页 |
3.1.2 花青素提取及测定 | 第21页 |
3.2 结果与分析 | 第21-22页 |
3.3 小结 | 第22页 |
4 红掌花青素合成6个相关基因全长cDNA的分离 | 第22-44页 |
4.1 植物材料 | 第22页 |
4.2 菌株和载体 | 第22页 |
4.3 培养基 | 第22-23页 |
4.4 试剂盒和主要试剂 | 第23页 |
4.5 引物 | 第23-24页 |
4.5.1 相关基因RACE特异引物 | 第23-24页 |
4.5.2 全长cDNA PCR特异引物 | 第24页 |
4.6 方法 | 第24-31页 |
4.6.1 RNA的提取及检测 | 第24-25页 |
4.6.2 3’RACE和5’RACE第一链cDNA的合成 | 第25-26页 |
4.6.3 合成全长cDNA PCR模板 | 第26-27页 |
4.6.4 3’和5’RACE PCR扩增 | 第27-28页 |
4.6.5 RACE扩增产物检测 | 第28页 |
4.6.6 T/A克隆与测序 | 第28-30页 |
4.6.7 全长cDNA PCR及检测 | 第30-31页 |
4.7 生物信息学分析工具 | 第31-32页 |
4.8 结果与分析 | 第32-38页 |
4.8.1 RNA定性与定量分析 | 第32页 |
4.8.2 cDNA全长序列拼接 | 第32-38页 |
4.9 生物信息学分析 | 第38-43页 |
4.9.1 开放阅读框(ORF) | 第38页 |
4.9.2 NCBI Blastn | 第38-39页 |
4.9.3 NCBI Blastp | 第39-41页 |
4.9.4 基因预测 | 第41-43页 |
4.9.5 结构域预测 | 第43页 |
4.10 小结 | 第43-44页 |
5 花青素合成相关6个基因的表达分析 | 第44-49页 |
5.1 植物材料 | 第44页 |
5.2 引物 | 第44页 |
5.3 方法 | 第44-45页 |
5.3.1 RNA的提取及检测 | 第44页 |
5.3.2 内参β-actin的选择与半定量RT-PCR引物设计 | 第44-45页 |
5.3.3 cDNA模板的合成 | 第45页 |
5.3.4 PCR反应 | 第45页 |
5.4 结果与分析 | 第45-48页 |
5.4.1 RNA定性与定量分析 | 第45-46页 |
5.4.2 β-actin片段的确定 | 第46-47页 |
5.4.3 半定量RT-PCR结果分析 | 第47-48页 |
5.5 小结 | 第48-49页 |
6 结论 | 第49页 |
7 讨论 | 第49-52页 |
7.1 红掌佛焰苞颜色、花青素含量及花青素合成相关基因表达分析的比较 | 第49-50页 |
7.2 实验中应注意的问题 | 第50页 |
7.3 下一步研究设想 | 第50-52页 |
附:彩图板 | 第52-59页 |
参考文献 | 第59-65页 |
致谢 | 第65页 |