| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-28页 |
| 1.1 慢性肾功能衰竭概述 | 第12页 |
| 1.1.1 慢性肾功能衰竭与尿毒症 | 第12页 |
| 1.1.2 中分子毒素 | 第12页 |
| 1.2 β_2-微球蛋白与透析相关淀粉样变 | 第12-15页 |
| 1.2.1 β_2-微球蛋白概述 | 第12-14页 |
| 1.2.2 透析相关淀粉样变的产生原因 | 第14页 |
| 1.2.3 透析相关淀粉样变的治疗方法 | 第14-15页 |
| 1.3 血液净化治疗β_2M血症 | 第15-20页 |
| 1.3.1 血液透析 | 第15页 |
| 1.3.2 血液灌流 | 第15-20页 |
| 1.4 卵黄抗体技术 | 第20-24页 |
| 1.4.1 卵黄抗体简介 | 第20-21页 |
| 1.4.2 鸡的免疫及卵黄抗体的获得 | 第21页 |
| 1.4.3 IgY的提取及初步分离纯化 | 第21-23页 |
| 1.4.4 IgY的精制纯化 | 第23页 |
| 1.4.5 IgY的应用研究 | 第23-24页 |
| 1.5 二价纳米抗体技术 | 第24-26页 |
| 1.5.1 纳米抗体简介 | 第24-25页 |
| 1.5.2 纳米抗体获取与噬菌体展示技术 | 第25页 |
| 1.5.3 二价纳米抗体 | 第25-26页 |
| 1.6 本论文的研究基础、目标和主要内容 | 第26-28页 |
| 2 抗β_2M卵黄抗体的制备、纯化与活性检测 | 第28-44页 |
| 2.1 绪论 | 第28页 |
| 2.2 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.2.1 实验材料和试剂 | 第28-29页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-35页 |
| 2.3.1 蛋鸡的免疫 | 第30页 |
| 2.3.2 IgY的提取和初步分离纯化 | 第30-31页 |
| 2.3.3 蛋白含量的测定 | 第31页 |
| 2.3.4 蛋白纯度及分子量的测定 | 第31页 |
| 2.3.5 特异性IgY的检测 | 第31-32页 |
| 2.3.6 IgY效价的检测 | 第32-33页 |
| 2.3.7 β_2M免疫亲和吸附剂的制备 | 第33-35页 |
| 2.3.8 不同路径合成的β_2M吸附剂对IgY的亲和纯化效果 | 第35页 |
| 2.3.9 两种β_2M吸附剂对非特异性(阴性对照)IgY的吸附效果 | 第35页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第35-43页 |
| 2.4.1 Bradford标准曲线 | 第35-36页 |
| 2.4.2 特异性IgY的检测 | 第36页 |
| 2.4.3 免疫应答曲线 | 第36-38页 |
| 2.4.4 IgY的初步分离 | 第38-39页 |
| 2.4.5 IgY的亲和纯化 | 第39-42页 |
| 2.4.6 两种β_2M免疫亲和吸附剂对非特异性IgY的吸附效果 | 第42-43页 |
| 2.5 小结 | 第43-44页 |
| 3 IgY吸附剂的制备及性能评价 | 第44-54页 |
| 3.1 绪论 | 第44页 |
| 3.2 实验材料 | 第44-45页 |
| 3.2.1 主要材料及试剂 | 第44-45页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第45页 |
| 3.3 实验方法 | 第45-48页 |
| 3.3.1 IgY吸附剂的合成路径 | 第45-47页 |
| 3.3.2 BCA法微量蛋白浓度测定 | 第47页 |
| 3.3.3 IgY吸附剂对β_2M结合能力的测定 | 第47页 |
| 3.3.4 吸附剂对血清中非特异性组分的吸附评价 | 第47-48页 |
| 3.3.5 吸附剂重复使用性评价 | 第48页 |
| 3.3.6 吸附剂物理化学稳定性评价 | 第48页 |
| 3.4 实验结果及讨论 | 第48-53页 |
| 3.4.1 微量BCA标准曲线 | 第48-49页 |
| 3.4.2 醛基化IgY的检测 | 第49页 |
| 3.4.3 IgY吸附剂对β_2M结合能力的测定 | 第49-51页 |
| 3.4.4 IgY吸附剂对血清中非特异性组分的吸附评价 | 第51页 |
| 3.4.5 IgY吸附剂重复使用性评价 | 第51-52页 |
| 3.4.6 IgY吸附剂的配基稳定性评价 | 第52-53页 |
| 3.5 小结 | 第53-54页 |
| 4 重组蛋白二价纳米抗体的原核表达及活性验证 | 第54-66页 |
| 4.1 绪论 | 第54页 |
| 4.2 实验材料 | 第54-57页 |
| 4.2.1 实验材料和试剂 | 第54-56页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第56-57页 |
| 4.3 实验方法 | 第57-61页 |
| 4.3.1 目的基因的合成 | 第57-58页 |
| 4.3.2 感受态细胞E.coli BL21(DE3)的制备及pET23a-VHH_2的转化 | 第58页 |
| 4.3.3 VHH_2的诱导表达及诱导条件优化 | 第58-59页 |
| 4.3.4 细胞的破碎及VHH_2的可溶性检测 | 第59页 |
| 4.3.5 VHH_2包涵体的清洗及复性 | 第59-60页 |
| 4.3.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第60页 |
| 4.3.7 复性后VHH_2的活性检测 | 第60-61页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第61-65页 |
| 4.4.1 重组质粒转化及目的蛋白的表达 | 第61页 |
| 4.4.2 VHH_2的可溶性检测 | 第61-62页 |
| 4.4.3 VHH_2诱导条件的优化 | 第62-63页 |
| 4.4.4 VHH_2包涵体的复性 | 第63-64页 |
| 4.4.5 复性后VHH_2溶液的活性检测 | 第64-65页 |
| 4.5 小结 | 第65-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-71页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
