| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 1 前言 | 第10-24页 |
| 1.1 木薯概述 | 第10-13页 |
| 1.1.1 木薯的特征特性 | 第10-12页 |
| 1.1.2 木薯的经济价值 | 第12-13页 |
| 1.2 木薯基因工程育种的研究进展 | 第13-20页 |
| 1.2.1 木薯遗传转化体系的研究进展 | 第13-18页 |
| 1.2.1.1 体细胞胚发生途径 | 第14-16页 |
| 1.2.1.2 器官发生途径 | 第16-18页 |
| 1.2.2 木薯基因转化方法的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.2.2.1 农杆菌介导法转化 | 第18-19页 |
| 1.2.2.2 基因枪法转化 | 第19-20页 |
| 1.3 高等植物蔗糖转运蛋白研究进展 | 第20-22页 |
| 1.3.1 蔗糖转运蛋白的生理功能 | 第21-22页 |
| 1.3.2 植物蔗糖转运蛋白基因的克隆 | 第22页 |
| 1.3.3 植物蔗糖转运蛋白的分类 | 第22页 |
| 1.4 研究目的、意义及技术路线 | 第22-24页 |
| 1.4.1 研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-38页 |
| 2.1 实验材料及条件 | 第24-26页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 根癌农杆菌菌株及载体 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要仪器及设备 | 第25页 |
| 2.1.4 主要试剂配制及保存 | 第25-26页 |
| 2.1.5 基本培养基成分 | 第26页 |
| 2.1.6 培养条件 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-38页 |
| 2.2.1 木薯再生体系的优化 | 第26-27页 |
| 2.2.1.1 木薯无菌材料的获得与保存 | 第26页 |
| 2.2.1.2 侧芽膨大及体细胞胚的诱导 | 第26-27页 |
| 2.2.1.3 体细胞胚的继代诱导 | 第27页 |
| 2.2.1.4 成熟子叶胚的诱导 | 第27页 |
| 2.2.1.5 不定芽诱导及茎伸长培养 | 第27页 |
| 2.2.1.6 成苗培养和移栽 | 第27页 |
| 2.2.2 木薯转化体系的优化 | 第27-30页 |
| 2.2.2.1 潮霉素(hyg)选择压的优化 | 第27-28页 |
| 2.2.2.2 抗生素(Carb)浓度的选择 | 第28页 |
| 2.2.2.3 PBI121空载转化不同农杆菌侵染木薯 | 第28-30页 |
| 2.2.3 农杆菌介导蔗糖转运蛋白基因转化木薯 | 第30-31页 |
| 2.2.3.1 根癌农杆菌工程菌液的制备 | 第30页 |
| 2.2.3.2 农杆菌侵染成熟子叶胚的过程,抗性苗的筛选及再生方法 | 第30-31页 |
| 2.2.4 木薯转化植株的分子检测 | 第31-38页 |
| 2.2.4.1 质粒提取 | 第31页 |
| 2.2.4.2 木薯基因组DNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.4.3 木薯总RNA小量提取(参照TransZol Plant试剂盒) | 第32-33页 |
| 2.2.4.4 PCR检测 | 第33-35页 |
| 2.2.4.5 Southern印记杂交检测转基因植株 | 第35-38页 |
| 3 实验结果与分析 | 第38-58页 |
| 3.1 木薯再生体系的优化研究 | 第38-47页 |
| 3.1.1 培养条件对木薯侧芽膨大及初级体细胞胚的影响 | 第38-40页 |
| 3.1.2 蔗糖浓度对不同品种木薯继代体细胞胚的影响 | 第40-42页 |
| 3.1.3 蔗糖浓度对培养成熟子叶胚的影响 | 第42-43页 |
| 3.1.4 IBA对木薯不定芽诱导的影响 | 第43-45页 |
| 3.1.5 AgNO_3对木薯不定芽诱导的影响 | 第45-47页 |
| 3.1.6 植株炼苗及移栽 | 第47页 |
| 3.2 木薯转化体系的优化 | 第47-52页 |
| 3.2.1 hyg浓度的选择 | 第47-49页 |
| 3.2.2 Carb浓度的选择 | 第49-50页 |
| 3.2.3 不同农杆菌菌种侵染木薯的影响 | 第50-52页 |
| 3.2.3.1 农杆菌侵染烟草 | 第50-51页 |
| 3.2.3.2 不同根癌农杆菌菌种对瞬时表达的影响 | 第51-52页 |
| 3.3 农杆菌介导蔗糖转运蛋白基因转化木薯及木薯植株筛选后再生 | 第52-54页 |
| 3.4 转基因植株的分子检测 | 第54-58页 |
| 3.4.1 木薯总DNA的提取 | 第54-55页 |
| 3.4.2 转SUT基因抗性植株PCR检测结果 | 第55-56页 |
| 3.4.3 RT-PCR检测结果 | 第56-57页 |
| 3.4.4 Southern印记杂交检测结果 | 第57-58页 |
| 4 讨论与研究展望 | 第58-62页 |
| 4.1 关于木薯再生体系的优化的探讨 | 第58-60页 |
| 4.2 关于木薯转化体系的优化的探讨 | 第60页 |
| 4.3 关于农杆菌介导蔗糖转运蛋白基因转化木薯的探讨 | 第60-61页 |
| 4.4 转基因木薯的分子检测 | 第61-62页 |
| 5 结论与研究展望 | 第62-64页 |
| 5.1 研究结论 | 第62-63页 |
| 5.1.1 探索获得木薯侧芽膨大、诱导体肝、器官发生、生根、出瓶移栽的最优条件 | 第62-63页 |
| 5.1.2 通过优化农杆菌介导转化木薯的遗传体系,获得转基因植株 | 第63页 |
| 5.2 展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 附录一 缩写词及其英汉对照 | 第72-73页 |
| 附录二 常用试剂配制 | 第73-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
