| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略语 | 第9-10页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-20页 |
| 1 研究背景、目的和意义 | 第13-15页 |
| 1.1 研究背景 | 第13-15页 |
| 1.1.1 小鼠胎肝红系分化 | 第13-14页 |
| 1.1.2 小鼠FVA细胞红系分化 | 第14页 |
| 1.1.3 肿瘤细胞的诱导分化 | 第14-15页 |
| 1.2 研究目的及意义 | 第15页 |
| 2 p38-2G4的研究概况 | 第15-18页 |
| 2.1 Ebp1对细胞增殖的影响 | 第17页 |
| 2.2 Ebp1对细胞分化的影响 | 第17页 |
| 2.3 Ebp1对细胞凋亡的影响 | 第17-18页 |
| 3 研究内容及路线 | 第18-20页 |
| 第二章 材料和方法 | 第20-44页 |
| 1 材料 | 第20页 |
| 1.1 细胞株,病毒及动物 | 第20页 |
| 1.2 菌株及质粒 | 第20页 |
| 2 试剂 | 第20-23页 |
| 3 仪器 | 第23-24页 |
| 4 试剂配制 | 第24-27页 |
| 5 实验方法 | 第27-44页 |
| 5.1 小鼠组织样品的制备 | 第27页 |
| 5.2 小鼠胎肝样品的制备 | 第27-28页 |
| 5.3 小鼠FVA细胞样品的制备 | 第28页 |
| 5.4 细胞培养 | 第28页 |
| 5.5 免疫印迹 | 第28-30页 |
| 5.5.1 蛋白样品的制备 | 第28-29页 |
| 5.5.2 Brandford法蛋白定量 | 第29页 |
| 5.5.3 Western blot | 第29-30页 |
| 5.6 半定量PCR | 第30-32页 |
| 5.6.1 细胞总RNA的提取 | 第30-31页 |
| 5.6.2 RT-PCR(TOYOBO Revertra Ace qRCR RT kit,code No.FSQ-101试剂盒) | 第31页 |
| 5.6.3 半定量PCR | 第31-32页 |
| 5.7 免疫细胞化学 | 第32-33页 |
| 5.7.1 细胞样品制备 | 第32页 |
| 5.7.2 免疫荧光共聚焦显微技术 | 第32-33页 |
| 5.8 高表达重组载体的构建 | 第33-35页 |
| 5.8.1 PCR扩增p38-2G4基因 | 第33页 |
| 5.8.2 PCR产物的回收 | 第33页 |
| 5.8.3 目的片段和质粒的双酶切 | 第33页 |
| 5.8.4 酶切产物割胶回收 | 第33-34页 |
| 5.8.5 连接 | 第34页 |
| 5.8.6 感受态制备 | 第34页 |
| 5.8.7 转化 | 第34-35页 |
| 5.8.8 PCR鉴定和双酶切鉴定 | 第35页 |
| 5.8.9 测序鉴定 | 第35页 |
| 5.9 低表达重组载体的构建 | 第35-37页 |
| 5.9.1 短发夹p38-2G4-shRNA序列的设计 | 第35-36页 |
| 5.9.2 寡核苷酸片段的退火 | 第36页 |
| 5.9.3 pLKO.1-TRC克隆载体的双酶切 | 第36页 |
| 5.9.4 连接 | 第36-37页 |
| 5.9.5 转化 | 第37页 |
| 5.9.6 阳性克隆的鉴定 | 第37页 |
| 5.9.7 测序鉴定 | 第37页 |
| 5.10 慢病毒的包装 | 第37-39页 |
| 5.10.1 质粒的大量制备 | 第37-39页 |
| 5.10.2 慢病毒包装 | 第39页 |
| 5.11 稳定细胞株的筛选及鉴定 | 第39-40页 |
| 5.12 生长曲线/MTT检测p38-2G4蛋白对MEL细胞增殖的影响 | 第40页 |
| 5.12.1 生长曲线 | 第40页 |
| 5.12.2 MTT 实验 | 第40页 |
| 5.13 联苯胺染色检测p38-2G4蛋白对MEL细胞分化的影响 | 第40页 |
| 5.14 流式细胞术检测p38-2G4蛋白对MEL细胞周期的影响(凯基试剂 | 第40-41页 |
| 5.15 p38-2G4的串联亲和纯化 | 第41-43页 |
| 5.16 数据分析 | 第43-44页 |
| 第三章 结果 | 第44-62页 |
| 1 p38-2G4蛋白在不同发育期的胎肝中的表达 | 第44-45页 |
| 2 p38-2G4蛋白在FVA细胞中的表达 | 第45-46页 |
| 3 p38-2G4蛋白在DMSO诱导MEL细胞分化中的表达 | 第46页 |
| 4 p38-2G4在小鼠组织和几种红系细胞中的表达谱 | 第46-47页 |
| 5 p38-2G4蛋白的亚细胞定位 | 第47-48页 |
| 6 p38-2G4蛋白在丁酸钠诱导MEL细胞分化过程中的表达 | 第48-50页 |
| 7 p38-2G4高表达和低表达MEL细胞稳定株的构建及筛选 | 第50-53页 |
| 7.1 p38-2G4-pLJM1高表达MEL细胞稳定株的构建及筛选 | 第50-52页 |
| 7.1.1 p38-2G4-pLJM 1高表达重组载体构建 | 第50-51页 |
| 7.1.2 p38-2G4-pLJM1高表达MEL细胞稳定株的筛选 | 第51-52页 |
| 7.2 p38-2G4-pLKO.1低表达MEL细胞稳定株的构建及筛选 | 第52-53页 |
| 8 p38-2G4蛋白对MEL细胞增殖的影响 | 第53-55页 |
| 8.1 p38-2G4蛋白高表达对MEL细胞增殖的影响 | 第53-54页 |
| 8.2 p38-2G4蛋白低表达对MEL细胞增殖的影响 | 第54-55页 |
| 9 p38-2G4蛋白对MEL细胞周期的影响 | 第55页 |
| 10 p38-2G4蛋白对MEL细胞分化的影响 | 第55-59页 |
| 10.1 p38-2G4蛋白高表达对MEL细胞分化的影响 | 第56-57页 |
| 10.2 p38-2G4蛋白低表达对MEL细胞分化的影响 | 第57-59页 |
| 11 p38-2G4蛋白相关蛋白的研究 | 第59-62页 |
| 11.1 p38-2G4-V51-S3重组载体的构建 | 第59-60页 |
| 11.2 p38-2G4-V51-S3重组质粒瞬时转染293T细胞 | 第60-62页 |
| 第四章 讨论 | 第62-64页 |
| 第五章 结论和展望 | 第64-65页 |
| 1 结论 | 第64页 |
| 2 展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
