| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-22页 |
| 1.1 课题来源及目的意义 | 第11页 |
| 1.2 课题背景 | 第11-12页 |
| 1.3 硫氧还蛋白系统的研究与利用现状 | 第12-19页 |
| 1.3.1 硫氧还蛋白系统 | 第12页 |
| 1.3.2 Trx 分类及其分布 | 第12-15页 |
| 1.3.3 Trx 的生物学活性 | 第15-16页 |
| 1.3.4 TrxR 分类与分布 | 第16-18页 |
| 1.3.5 TrxR 的生物学功能 | 第18-19页 |
| 1.4 南极微生物的研究现状 | 第19-20页 |
| 1.5 研究的主要内容 | 第20-22页 |
| 第2章 Pseudoalteromonas sp.ANT178 Trx 特性研究 | 第22-33页 |
| 2.1 材料 | 第22页 |
| 2.1.1 菌株来源 | 第22页 |
| 2.1.2 培养基及配制 | 第22页 |
| 2.2 方法 | 第22-25页 |
| 2.2.1 PsTrx 基因序列的生物信息学分析 | 第22-23页 |
| 2.2.2 PsTrx 异源表达与分离纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.3 Trx 活性的测定 | 第24-25页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第25-31页 |
| 2.3.1 PsTrx 基因序列生物信息学分析结果 | 第25-28页 |
| 2.3.2 PsTrx 异源表达蛋白的分离纯化 | 第28-29页 |
| 2.3.3 温度对蛋白活性的影响 | 第29页 |
| 2.3.4 温度对蛋白稳定性的影响 | 第29-30页 |
| 2.3.5 pH 对蛋白活性的影响 | 第30-31页 |
| 2.3.6 盐度对蛋白活性的影响 | 第31页 |
| 2.3.7 抑制剂和金属离子对 PsTrx 活性的影响 | 第31页 |
| 2.4 本章小结 | 第31-33页 |
| 第3章 不同盐度对 PsTrx 表达影响的研究 | 第33-46页 |
| 3.1 材料 | 第33-35页 |
| 3.1.1 菌种来源 | 第33-34页 |
| 3.1.2 主要分子生物学试剂及器材 | 第34页 |
| 3.1.3 试剂及其配制 | 第34-35页 |
| 3.2 方法 | 第35-40页 |
| 3.2.1 PsTrx 阳性重组菌耐盐生长状况的测定 | 第35页 |
| 3.2.2 FQ-PCR 实验用品的预处理 | 第35页 |
| 3.2.3 菌株培养及其收集 | 第35-36页 |
| 3.2.4 总 mRNA 的提取 | 第36页 |
| 3.2.5 去除 DNA 基因组及反转录 cDNA 的合成 | 第36-37页 |
| 3.2.6 实时荧光定量 PCR 引物的设计与合成 | 第37-38页 |
| 3.2.7 普通 PCR 对反转录产物进行验证 | 第38页 |
| 3.2.8 实时荧光定量 PCR 反应 | 第38-40页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第40-45页 |
| 3.3.1 PsTrx 重组菌的耐盐生长状况 | 第40-41页 |
| 3.3.2 RNA 提取及普通 PCR 验证 | 第41页 |
| 3.3.3 FQ-PCR 反应产物的溶解曲线分析 | 第41-43页 |
| 3.3.4 FQ-PCR 测定 PsTrx 基因表达特征分析 | 第43-45页 |
| 3.4 本章小结 | 第45-46页 |
| 第4章 PsTrxR 基因的克隆、表达及酶学特性分析 | 第46-65页 |
| 4.1 材料 | 第46页 |
| 4.1.1 菌株材料 | 第46页 |
| 4.2 方法 | 第46-51页 |
| 4.2.1 活化菌株 | 第46页 |
| 4.2.2 菌体基因组的提取及鉴定 | 第46-47页 |
| 4.2.3 设计引物 | 第47页 |
| 4.2.4 PCR 扩增及基因测序 | 第47-48页 |
| 4.2.5 PsTrxR 基因序列的生物信息学分析 | 第48页 |
| 4.2.6 PCR 产物的纯化 | 第48页 |
| 4.2.7 PsTrxR 基因的表达 | 第48-50页 |
| 4.2.8 PsTrxR 融合蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| 4.2.9 PsTrxR 酶学性质研究 | 第51页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第51-64页 |
| 4.3.1 PsTrxR 基因的克隆 | 第51-52页 |
| 4.3.2 基因序列生物信息学分析结果 | 第52-56页 |
| 4.3.3 PsTrxR 异源表达载体的构建 | 第56-58页 |
| 4.3.4 PsTrxR 重组蛋白的纯化 | 第58-59页 |
| 4.3.5 温度对酶活性的影响 | 第59-60页 |
| 4.3.6 温度对酶稳定性的影响 | 第60-61页 |
| 4.3.7 pH 对酶活性的影响 | 第61-62页 |
| 4.3.8 盐度对酶活性的影响 | 第62页 |
| 4.3.9 抑制剂和金属离子对酶活性的影响 | 第62-63页 |
| 4.3.10 酶动力学参数的计算 | 第63-64页 |
| 4.4 本章小结 | 第64-65页 |
| 结论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
