| 摘要 | 第5-7页 |
| 英文摘要 | 第7-8页 |
| 英文缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一篇 综述 | 第13-26页 |
| 1 病原分类学 | 第13-14页 |
| 2 病原及基因组特点 | 第14-15页 |
| 3 嗜吞噬细胞无形体的入侵机制 | 第15-17页 |
| 4 传播媒介及宿主动物 | 第17-19页 |
| 5 流行病学 | 第19-20页 |
| 6 临床症状及治疗 | 第20-21页 |
| 7 诊断和实验室检测 | 第21-23页 |
| 7.1 临床症状 | 第21页 |
| 7.2 直接鉴定 | 第21页 |
| 7.3 PCR检测和病原分离培养 | 第21页 |
| 7.4 血清学诊断 | 第21-22页 |
| 7.5 病理学诊断 | 第22-23页 |
| 8 P44/msp2蛋白 | 第23-26页 |
| 第二篇 实验研究 | 第26-75页 |
| 实验一 msp2、msp4蛋白全长中信号肽对原核表达的影响 | 第26-44页 |
| 摘要 | 第26-27页 |
| 1 材料和方法 | 第27-32页 |
| 1.1 材料 | 第27页 |
| 1.1.1 序列来源及菌株 | 第27页 |
| 1.1.2 主要仪器设备 | 第27页 |
| 1.2 方法 | 第27-31页 |
| 1.2.1 质粒转化 | 第27-28页 |
| 1.2.2 阳性表达菌BL21（DE3）鉴定 | 第28-29页 |
| 1.2.3 阳性表达菌的诱导表达 | 第29-31页 |
| 1.3 pET28a表达载体的构建及表达菌的诱导 | 第31-32页 |
| 1.3.1 三个重组的pET32a质粒与pET28a（+）空载体酶切 | 第31页 |
| 1.3.2 目的片段与pET-28a大片段连接 | 第31-32页 |
| 1.3.3 连接产物转化表达菌BL21（DE3） | 第32页 |
| 1.3.4 pET28a阳性重组表达菌的鉴定 | 第32页 |
| 1.3.5 阳性表达菌的诱导表达 | 第32页 |
| 1.4 pGEX-4T-1表达载体的构建和表达菌的诱导 | 第32页 |
| 1.5 E-msp2、N-msp4、Z-msp4的信号肽分析 | 第32页 |
| 2 实验结果 | 第32-41页 |
| 2.1 合成的三个表面蛋白全长基因的pET32a载体酶切鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2 重组质粒pET32a（+）诱导表达情况 | 第33-34页 |
| 2.3 重组质粒pET28a（+）表达载体的酶切鉴定 | 第34-36页 |
| 2.4 重组质粒pET28a（+）诱导表达情况 | 第36-37页 |
| 2.5 重组质粒pGEX-4T-1表达载体的酶切鉴定 | 第37-38页 |
| 2.6 重组质粒pGEX-4T-1诱导表达情况 | 第38-39页 |
| 2.7 信号肽分析结果 | 第39-41页 |
| 3 讨论 | 第41-44页 |
| 3.1 信号肽对原核蛋白表达的影响 | 第41-42页 |
| 3.2 跨膜区对原核蛋白表达的影响 | 第42页 |
| 3.3 稀有密码子对原核蛋白表达的影响 | 第42-44页 |
| 实验二 嗜吞噬细胞无形体msp2、msp4蛋白的生物信息学分析及表达纯化 | 第44-66页 |
| 摘要 | 第44-45页 |
| 1 方法和材料 | 第45-48页 |
| 1.1 材料 | 第45页 |
| 1.1.1 菌株和试剂 | 第45页 |
| 1.1.2 主要仪器设备 | 第45页 |
| 1.2 实验方法 | 第45-48页 |
| 1.2.1 msp2、msp4蛋白的生物信息学分析 | 第45-46页 |
| 1.2.2 引物设计 | 第46-47页 |
| 1.2.3 原核表达载体构建 | 第47页 |
| 1.2.4 蛋白的诱导表达 | 第47页 |
| 1.2.5 重组蛋白的表达形式分析 | 第47页 |
| 1.2.6 重组蛋白表达条件的优化 | 第47-48页 |
| 1.2.7 Western-blot分析 | 第48页 |
| 1.2.8 重组蛋白的纯化 | 第48页 |
| 1.2.9 纯化后的重组蛋白的浓度测定（BCA法） | 第48页 |
| 2 结果 | 第48-64页 |
| 2.1 msp2、msp4蛋白的生物信息学分析结果 | 第48-55页 |
| 2.1.1 ProtParam工具分析结果 | 第48-50页 |
| 2.1.2 SOPMA预测msp2、msp4蛋白的二级结构 | 第50-51页 |
| 2.1.3 msp2、msp4蛋白的跨膜区预测结果 | 第51-52页 |
| 2.1.4 msp2、msp4蛋白的亲水性预测结果 | 第52-54页 |
| 2.1.5 msp2、msp4蛋白的抗原表位分析 | 第54-55页 |
| 2.2 原核表达载体的构建 | 第55-58页 |
| 2.3 小量蛋白诱导表达 | 第58-60页 |
| 2.4 重组蛋白的表达形式分析 | 第60-61页 |
| 2.5 蛋白的诱导条件的优化 | 第61-62页 |
| 2.5.1 不同浓度下IPTG对蛋白表达的影响 | 第61-62页 |
| 2.5.2 低温条件下对蛋白的表达形式的影响 | 第62页 |
| 2.6 蛋白的纯化 | 第62-63页 |
| 2.7 WesternBlot | 第63-64页 |
| 3 讨论 | 第64-66页 |
| 实验三 重组msp2、msp4蛋白的免疫原性研究 | 第66-75页 |
| 摘要 | 第66页 |
| 1 材料和方法 | 第66-69页 |
| 1.1 材料 | 第66-67页 |
| 1.1.1 主要试剂 | 第66-67页 |
| 1.1.2 主要血清 | 第67页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第67页 |
| 1.1.4 实验动物 | 第67页 |
| 1.1.5 主要试剂的配制 | 第67页 |
| 1.2 方法 | 第67-69页 |
| 1.2.1 重组蛋白的多抗的制备 | 第67页 |
| 1.2.2 小鼠抗体水平的测定-ELISA | 第67-68页 |
| 1.2.3 间接ELISA最佳工作条件的的确定 | 第68-69页 |
| 2 结果 | 第69-73页 |
| 2.1 小鼠抗体水平的测定 | 第69-70页 |
| 2.2 ELISA工作条件的确定 | 第70-73页 |
| 2.2.1 抗原包被的最佳浓度和待检血清最佳稀释倍数的确定 | 第70页 |
| 2.2.2 最适封闭液的和封闭时间的确定 | 第70-71页 |
| 2.2.3 酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第71页 |
| 2.2.5 底物作用时间的确定 | 第71-72页 |
| 2.2.6 cut-off值的确定 | 第72页 |
| 2.2.7 特异性试验 | 第72页 |
| 2.2.8 灵敏性试验 | 第72页 |
| 2.2.9 重复性试验 | 第72页 |
| 2.2.10 临床样品检测 | 第72-73页 |
| 3 讨论 | 第73-75页 |
| 第三篇 实验结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-87页 |
| 附件 | 第87-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 作者简介及在研究生期间主要参与的研究项目、发表文章 | 第92-93页 |
| 石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表 | 第93页 |
