| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 缩略词 Abbreviation | 第14-15页 |
| 1 前言 | 第15-24页 |
| 1.1 植物乙烯生物合成研究进展 | 第15-18页 |
| 1.1.1 乙烯合成途径中的相关酶 | 第16-17页 |
| 1.1.2 Ca~(2+)信号转导系统影响乙烯生物合成 | 第17页 |
| 1.1.3 MAP蛋白激酶级联反应在乙烯合成途径中的作用 | 第17-18页 |
| 1.2 乙烯信号转导途径研究进展 | 第18-20页 |
| 1.2.1 EIN2在乙烯信号转导中的作用 | 第19-20页 |
| 1.2.2 EIN3在乙烯信号转导中的作用 | 第20页 |
| 1.3 ERF转录因子研究进展 | 第20-22页 |
| 1.3.1 ERF基因家族简介 | 第20-21页 |
| 1.3.2 ERF转录因子作用机理研究 | 第21-22页 |
| 1.4 园艺作物中果实乙烯合成及信号转导途径研究进展 | 第22-23页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-39页 |
| 2.1 试验材料与处理 | 第24页 |
| 2.2 试验方法 | 第24-39页 |
| 2.2.1 乙烯含量测定 | 第24-25页 |
| 2.2.2 基因克隆与表达分析 | 第25-26页 |
| 2.2.3 总蛋白质提取及定量 | 第26-28页 |
| 2.2.4 蛋白质原核表达与纯化 | 第28-30页 |
| 2.2.5 Western blot试验 | 第30-32页 |
| 2.2.6 酵母双杂交试验 | 第32-33页 |
| 2.2.7 Pull down试验 | 第33-34页 |
| 2.2.8 蛋白质免疫共沉淀(CoIP)试验 | 第34页 |
| 2.2.9 酵母单杂交试验 | 第34-35页 |
| 2.2.10 凝胶阻滞(EMSA)试验 | 第35-36页 |
| 2.2.11 染色质免疫共沉淀(ChIP-PCR)试验 | 第36-37页 |
| 2.2.12 GUS活性测定 | 第37页 |
| 2.2.13 农杆菌注射试验 | 第37-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-67页 |
| 3.1 MdERF2和MdERF3的表达模式 | 第39-40页 |
| 3.1.1 MdERF2和MdERF3的组织特异性表达 | 第39页 |
| 3.1.2 MdERF2和MdERF3对乙烯的响应模式 | 第39-40页 |
| 3.2 MdERF2负调控苹果愈伤组织乙烯的合成 | 第40-43页 |
| 3.2.1 苹果愈伤组织MdERF2沉默和过表达效果检测 | 第41页 |
| 3.2.2 MdERF2负调控苹果愈伤组织MdACS1的表达及乙烯的合成 | 第41-43页 |
| 3.3 MdERF2对MdACS1启动子转录活性的调控 | 第43-46页 |
| 3.3.1 酵母单杂交试验验证MdERF2结合MdACS1启动子 | 第43-44页 |
| 3.3.2 染色质免疫共沉淀试验(ChIP-PCR)验证MdERF2结合MdACS1启动子 | 第44-45页 |
| 3.3.3 GUS报告基因试验分析MdERF2对MdACS1启动子转录活性的调控 | 第45-46页 |
| 3.4 MdERF2对MdERF3启动子转录活性的调控 | 第46-51页 |
| 3.4.1 酵母单杂交试验验证MdERF2结合MdERF3启动子 | 第47-49页 |
| 3.4.2 染色质免疫共沉淀试验(ChIP-PCR)验证MdERF2结合MdERF3启动子 | 第49-50页 |
| 3.4.3 GUS报告基因试验分析MdERF2对MdERF3启动子转录活性的调控 | 第50-51页 |
| 3.5 MdERF3正调控苹果愈伤MdACS1的转录 | 第51-53页 |
| 3.5.1 苹果愈伤组织MdERF3沉默和过表达效果检测 | 第51-52页 |
| 3.5.2 MdERF3正调控苹果愈伤组织MdACS1的表达 | 第52-53页 |
| 3.6 MdERF3对MdACS1启动子转录活性的调控 | 第53-56页 |
| 3.6.1 酵母单杂交试验验证MdERF3结合MdACS1启动子 | 第54页 |
| 3.6.2 染色质免疫共沉淀试验(ChIP-PCR)验证MdERF3结合MdACS1启动子 | 第54-55页 |
| 3.6.3 GUS报告基因试验分析MdERF3对MdACS1启动子转录活性的调控 | 第55-56页 |
| 3.7 MdERF2与MdERF3互作 | 第56-60页 |
| 3.7.1 MdERF2和MdERF3互作的Pull down验证 | 第57-58页 |
| 3.7.2 MdERF2和MdERF3互作的免疫共沉淀(CoIP)验证 | 第58-59页 |
| 3.7.3 MdERF2与MdERF3的互作区段分析 | 第59-60页 |
| 3.8 MdERF2与MdERF3互作对MdACS1启动子活性的影响 | 第60-63页 |
| 3.8.1 MdERF2与MdERF3互作抑制MdERF3结合MdACS1启动子 | 第61-62页 |
| 3.8.2 MdERF2与MdERF3互作抑制MdACS1启动子活性 | 第62-63页 |
| 3.9 MdERF2和MdERF3在苹果果实成熟过程中的基因功能验证 | 第63-67页 |
| 4 讨论 | 第67-71页 |
| 4.1 MdERF2与MdA CS1启动子直接结合且负调控其表达 | 第67页 |
| 4.2 MdERF2通过抑制MdERF3转录间接抑制MdACS1表达 | 第67-68页 |
| 4.3 MdERF2与MdERF3互作抑制MdERF3调控MdACS1的转录 | 第68-69页 |
| 4.4 MdERF2负调控苹果果实乙烯合成 | 第69-71页 |
| 5 结论与创新点 | 第71-72页 |
| 5.1 结论 | 第71页 |
| 5.2 创新点 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-82页 |
| 附录 | 第82-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文目录 | 第90页 |
