| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3页 |
| 引言 | 第7-8页 |
| 材料 | 第8-10页 |
| 第一章 慢病毒GV115-Survivin转染反分化早期和晚期椎间盘髓核细胞生物学效应的比较 | 第10-16页 |
| 1.1 方法 | 第10-12页 |
| 1.1.1 技术路线图 | 第10页 |
| 1.1.2 人椎间盘髓核细胞的分离培养 | 第10-11页 |
| 1.1.3 反分化早期和晚期椎间盘髓核细胞的建立 | 第11页 |
| 1.1.4 免疫荧光法检测GV115-Survivin转染前后髓核细胞Survivin的表达 | 第11页 |
| 1.1.5 MTT法检测GV115-Survivin转染前后髓核细胞的活性 | 第11-12页 |
| 1.1.6 Antonopulos法检测GV115-Survivin转染前后髓核细胞蛋白多糖的合成6 | 第12页 |
| 1.1.7 Western-Blot法检测GV115-Survivin转染前后髓核细胞II型胶原的合成 | 第12页 |
| 1.1.8 统计学方法 | 第12页 |
| 1.2 结果 | 第12-16页 |
| 1.2.1 反分化早期和晚期椎间盘髓核细胞 | 第12-13页 |
| 1.2.2 GV115-Survivin的转染效率 | 第13页 |
| 1.2.3 髓核细胞Survivin蛋白表达的检测比较 | 第13-14页 |
| 1.2.4 髓核细胞活性的检测比较 | 第14-15页 |
| 1.2.5 髓核细胞II型胶原合成的检测比较 | 第15页 |
| 1.2.6 髓核细胞蛋白多糖合成的检测比较 | 第15-16页 |
| 第二章 GV115-Caspase3 siRNA重组表达系统的构建及转染反分化晚期椎间盘髓核细胞的生物学效应 | 第16-38页 |
| 2.1 方法 | 第16-24页 |
| 2.1.1 技术路线图 | 第16页 |
| 2.1.2 Caspase-3 siRNA片段的设计合成 | 第16-17页 |
| 2.1.3 GV115-Caspase3 siRNA重组质粒的制备与鉴定 | 第17-19页 |
| 2.1.4 人胚肾 293T细胞的复苏培养及传代 | 第19页 |
| 2.1.5 GV115-Caspase3 siRNA病毒的包装 | 第19-20页 |
| 2.1.6 GV115-Caspase3 siRNA病毒感染相关参数的确定 | 第20页 |
| 2.1.7 GV115-Caspase3 siRNA病毒的筛选 | 第20-22页 |
| 2.1.8 反分化晚期人椎间盘髓核细胞的建立 | 第22页 |
| 2.1.9 免疫荧光法检测GV115-Caspase3 siRNA转染前后髓核细胞Caspase-3 的表达 | 第22-23页 |
| 2.1.10 MTT法检测GV115-Caspase3 siRNA转染前后髓核细胞的活性 | 第23页 |
| 2.1.11. Antonopulos法检测GV115-Caspase3 siRNA转染前后髓核细胞蛋白多糖的合成 | 第23页 |
| 2.1.12 Western-Blot法检测GV115-Caspase3 siRNA转染前后髓核细胞II型胶原的合成 | 第23-24页 |
| 2.1.13 统计学方法 | 第24页 |
| 2.2. 结果 | 第24-38页 |
| 2.2.1 Caspase-3 siRNA片段的设计 | 第24页 |
| 2.2.2 Caspase-3 siRNA构建框架及合成片段 | 第24-25页 |
| 2.2.3 GV115-Caspase3 siRNA重组质粒的PCR鉴定 | 第25-27页 |
| 2.2.4 GV115-Caspase3 siRNA重组质粒的测序鉴定 | 第27-29页 |
| 2.2.5 GV115-Caspase3 siRNA病毒感染条件和感染参数的确定 | 第29-30页 |
| 2.2.6 GV115-Caspase3 siRNA病毒筛选实验 | 第30-35页 |
| 2.2.7 人椎间盘髓核细胞及GV115-Caspase3 siRNA对其转染效率 | 第35-36页 |
| 2.2.8 髓核细胞活性的检测比较 | 第36页 |
| 2.2.9 髓核细胞Caspase-3 蛋白表达的检测比较 | 第36-37页 |
| 2.2.10 髓核细胞II型胶原合成的检测比较 | 第37页 |
| 2.2.11 髓核细胞蛋白多糖合成的检测比较 | 第37-38页 |
| 讨论 | 第38-41页 |
| 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-44页 |
| 综述 | 第44-55页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
