| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 前言 | 第13-24页 |
| 1.1 猪流行性腹泻病毒 | 第14-17页 |
| 1.1.1 PEDV概述 | 第14页 |
| 1.1.2 PEDV的分子生物学特性 | 第14-15页 |
| 1.1.3 临床症状及病理变化 | 第15-16页 |
| 1.1.4 PEDV检测方法研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2 猪传染性胃肠炎病毒 | 第17-20页 |
| 1.2.1 TGEV概述 | 第17-18页 |
| 1.2.2 TGEV基因组成 | 第18页 |
| 1.2.3 TGE临床症状及病理变化 | 第18-19页 |
| 1.2.4 TGEV检测方法的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.3 猪轮状病毒 | 第20-22页 |
| 1.3.1 RV概括 | 第20页 |
| 1.3.2 RV的病毒形态 | 第20-21页 |
| 1.3.3 轮状病毒分类 | 第21页 |
| 1.3.4 轮状病毒检测方法 | 第21-22页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-41页 |
| 2.1 材料 | 第24-28页 |
| 2.1.1 毒株与疫苗 | 第24页 |
| 2.1.2 菌种和质粒 | 第24页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第24页 |
| 2.1.5 试验中配制的试剂 | 第24-28页 |
| 2.2 方法 | 第28-41页 |
| 2.2.1 PEDV-TGEV-RV单一PCR方法的建立 | 第28-33页 |
| 2.2.2 PEDV-TGEV-RV多重PCR检测方法的建立与临床样品检测分析 | 第33-34页 |
| 2.2.3 PEDV S90蛋白表达与条件优化 | 第34-38页 |
| 2.2.4 PEDV S90间接ELISA检测方法的建立与应用 | 第38-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-63页 |
| 3.1 PEDV、TGEV和RV单一PCR方法的建立 | 第41-48页 |
| 3.1.1 检测引物的PCR扩增 | 第41-42页 |
| 3.1.2 阳性质粒的双酶切鉴定结果 | 第42-43页 |
| 3.1.3 PCR反应条件的优化 | 第43-46页 |
| 3.1.4 单一PCR体系及反应程序的确立 | 第46-47页 |
| 3.1.5 阳性克隆序列测定 | 第47-48页 |
| 3.2 PEDV-TGEV-RV多重PCR检测方法的建立与临床样品检测分析 | 第48-52页 |
| 3.2.1 多重PCR方法的建立 | 第48-49页 |
| 3.2.2 多重PCR反应的特异性 | 第49-50页 |
| 3.2.3 多重PCR反应的灵敏性 | 第50页 |
| 3.2.4 多重PCR的重复性试验 | 第50-51页 |
| 3.2.5 样品检测结果 | 第51-52页 |
| 3.3 PEDV S90蛋白表达结果 | 第52-55页 |
| 3.3.1 目的基因RT-PCR扩增 | 第52页 |
| 3.3.2 原核重组表达质粒的构建 | 第52页 |
| 3.3.3 重组表达质粒阳性的鉴定 | 第52-53页 |
| 3.3.4 阳性克隆序列测定 | 第53页 |
| 3.3.5 SDS-PAGE分析 | 第53页 |
| 3.3.6 诱导表达条件优化 | 第53-54页 |
| 3.3.7 目的蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| 3.3.8 Western blot鉴定分析 | 第55页 |
| 3.4 间接ELISA检测方法的建立 | 第55-63页 |
| 3.4.1 蛋白浓度测定 | 第55-56页 |
| 3.4.2 抗原最适合包被浓度和抗体最佳稀释度的确定 | 第56页 |
| 3.4.3 封闭液的确定 | 第56-57页 |
| 3.4.4 最优封闭时间选择 | 第57页 |
| 3.4.5 最佳血清孵育时间的确定 | 第57页 |
| 3.4.6 二抗最佳稀释度选择 | 第57-58页 |
| 3.4.7 底物最佳反应时间的确定 | 第58页 |
| 3.4.8 间接ELISA方法的判断标准的确定 | 第58-59页 |
| 3.4.9 特异性检验 | 第59页 |
| 3.4.10 重复性实验结果 | 第59-60页 |
| 3.4.11 符合性检验 | 第60-61页 |
| 3.4.12 临床样品检测 | 第61-63页 |
| 4 讨论 | 第63-69页 |
| 4.1 PCR方法建立与临床检测 | 第63-64页 |
| 4.2 PEDV S90蛋白的原核表达与条件优化 | 第64-66页 |
| 4.3 PEDV S90间接ELISA的研究 | 第66-69页 |
| 5 结论 | 第69-70页 |
| 6 参考文献 | 第70-77页 |
| 7 致谢 | 第77页 |
