| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-19页 |
| 第一节 禽腺病毒概况 | 第12-18页 |
| 1.1 禽腺病毒的分类 | 第12页 |
| 1.2 禽腺病毒的形态结构与理化特性 | 第12-13页 |
| 1.3 禽腺病毒的基因组结构 | 第13-14页 |
| 1.3.1 E区 | 第13页 |
| 1.3.2 L区 | 第13-14页 |
| 1.3.3 ITR | 第14页 |
| 1.4 禽腺病毒的主要编码蛋白及其功能 | 第14-15页 |
| 1.4.1 结构蛋白 | 第14-15页 |
| 1.4.2 非结构蛋白 | 第15页 |
| 1.5 禽腺病毒的流行病学与致病性 | 第15-16页 |
| 1.6 禽腺病毒的诊断技术 | 第16-18页 |
| 1.6.1 病毒分离 | 第16页 |
| 1.6.2 中和试验 | 第16页 |
| 1.6.3 琼脂扩散试验 | 第16-17页 |
| 1.6.4 分子生物学技术 | 第17页 |
| 1.6.5 酶联免疫吸附试验 | 第17-18页 |
| 第二节 研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 第二章 禽腺病毒hexon基因片段的原核表达及纯化 | 第19-36页 |
| 1 材料 | 第19-20页 |
| 1.1 病毒、载体与菌种 | 第19页 |
| 1.2 主要试剂 | 第19页 |
| 1.3 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2 方法 | 第20-29页 |
| 2.1 病毒DNA的提取 | 第20页 |
| 2.2 禽腺病毒保守基因片段的PCR扩增 | 第20-21页 |
| 2.2.1 禽腺病毒保守基因片段的选取 | 第20页 |
| 2.2.2 引物的设计与合成 | 第20-21页 |
| 2.2.3 目的基因PCR扩增体系及程序 | 第21页 |
| 2.2.4 PCR产物回收纯化 | 第21页 |
| 2.3 原核表达载体的线性化与回收 | 第21-22页 |
| 2.3.1 引物的设计与合成 | 第21-22页 |
| 2.3.2 载体PCR扩增体系及程序 | 第22页 |
| 2.3.3 PCR产物回收纯化 | 第22页 |
| 2.4 重组表达载体的构建与鉴定 | 第22-24页 |
| 2.4.1 重组载体构建原理及示意图 | 第22-23页 |
| 2.4.2 重组反应 | 第23页 |
| 2.4.3 反应产物转化、涂板 | 第23-24页 |
| 2.4.4 重组质粒的PCR鉴定 | 第24页 |
| 2.4.5 序列比对鉴定 | 第24页 |
| 2.5 重组蛋白的诱导表达及鉴定 | 第24-26页 |
| 2.5.1 阳性重组质粒转化 | 第24页 |
| 2.5.2 重组蛋白的诱导表达 | 第24-25页 |
| 2.5.3 SDS-PAGE分析重组蛋白的表达 | 第25页 |
| 2.5.4 重组蛋白的Western-blot鉴定 | 第25-26页 |
| 2.6 Hexon蛋白的提取、纯化及鉴定 | 第26-27页 |
| 2.6.1 hexon蛋白的可溶性分析 | 第26页 |
| 2.6.2 切胶纯化 | 第26-27页 |
| 2.6.3 纯化产物的SDS-PAGE分析鉴定 | 第27页 |
| 2.6.4 纯化产物的Western-blot鉴定 | 第27页 |
| 2.7 hexon基因可溶性表达尝试 | 第27-28页 |
| 2.7.1 引物的设计与合成 | 第27-28页 |
| 2.7.2 PCR扩增 | 第28页 |
| 2.7.3 扩增产物的酶切及回收 | 第28页 |
| 2.8 pET-32a及pCold Ⅰ重组表达载体的构建与鉴定 | 第28页 |
| 2.8.1 载体的线性化和回收 | 第28页 |
| 2.8.2 连接转化 | 第28页 |
| 2.8.3 重组质粒的酶切鉴定 | 第28页 |
| 2.9 pET-32a及pCold Ⅰ重组质粒的诱导表达及鉴定 | 第28页 |
| 2.10 His标签重组蛋白的纯化 | 第28-29页 |
| 2.10.1 包涵体的洗涤与纯化 | 第29页 |
| 2.10.2 包涵体的复性 | 第29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-35页 |
| 3.1 hexon基因片段的扩增 | 第29页 |
| 3.2 重组质粒的PCR鉴定 | 第29-30页 |
| 3.3 GST重组蛋白的诱导表达 | 第30-31页 |
| 3.4 GST重组蛋白的Western-blot鉴定 | 第31-32页 |
| 3.5 GST重组蛋白的纯化 | 第32页 |
| 3.6 用于构建pET-hexon1和pCold-hexon1载体的基因PCR扩增 | 第32-33页 |
| 3.7 His标签重组质粒的酶切鉴定 | 第33页 |
| 3.8 His标签重组质粒的诱导表达 | 第33-34页 |
| 3.9 His标签重组蛋白的westen blot鉴定及纯化 | 第34-35页 |
| 4 小结与讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 间接ELISA检测FAdV抗体方法的建立 | 第36-45页 |
| 1 材料 | 第36页 |
| 1.1 生物材料 | 第36页 |
| 1.2 主要试剂与耗材 | 第36页 |
| 1.3 主要仪器 | 第36页 |
| 2 方法 | 第36-38页 |
| 2.1 间接ELISA方法检测抗体常规步骤: | 第36-37页 |
| 2.2 ELISA方法反应条件的优化 | 第37-38页 |
| 2.2.1 抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定 | 第37页 |
| 2.2.2 血清最佳作用时间的确定 | 第37页 |
| 2.2.3 酶标二抗最佳稀释度的确定 | 第37-38页 |
| 2.2.4 酶标二抗最佳作用时间的确定 | 第38页 |
| 2.2.5 底物最佳作用时间的确定 | 第38页 |
| 2.3 ELISA结果判定标准的确定 | 第38页 |
| 2.4 ELISA方法特异性试验 | 第38页 |
| 2.5 间接ELISA方法的应用 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-43页 |
| 3.1 ELISA方法反应条件的确定 | 第38-42页 |
| 3.1.1 抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定 | 第38-39页 |
| 3.1.2 血清最佳反应时间的确定 | 第39-40页 |
| 3.1.3 酶标二抗最佳稀释度的确定 | 第40页 |
| 3.1.4 酶标二抗最佳作用时间的确定 | 第40-41页 |
| 3.1.5 底物最佳作用时间的确定 | 第41-42页 |
| 3.2 ELISA方法结果判定标准的确定 | 第42页 |
| 3.3 特异性试验 | 第42-43页 |
| 3.4 ELISA方法的初步应用 | 第43页 |
| 4 小结与讨论 | 第43-45页 |
| 全文总结 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
