| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-23页 |
| 1.1 概述 | 第15-16页 |
| 1.2 to基因的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.2.1 TO蛋白在昆虫中组织特异性表达 | 第17-18页 |
| 1.2.2 to基因的功能研究 | 第18-19页 |
| 1.3 JH的概述 | 第19-20页 |
| 1.3.1 JH对幼虫生长发育及变态发育调控的研究 | 第19-20页 |
| 1.3.2 JH对昆虫生殖发育调控的研究 | 第20页 |
| 1.3.3 JH对昆虫寿命调控的研究 | 第20页 |
| 1.4 20E的概述 | 第20-23页 |
| 1.4.1 20E对生殖过程调节模式的研究 | 第21页 |
| 1.4.2 20E参与求偶行为调控的研究 | 第21-23页 |
| 第二章 引言 | 第23-25页 |
| 2.1 研究背景及研究意义 | 第23页 |
| 2.2 研究内容 | 第23-24页 |
| 2.3 技术路线 | 第24-25页 |
| 第三章 家蚕Bmtol基因的克隆与生物信息学分析 | 第25-49页 |
| 3.1 实验材料与试剂 | 第25-28页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第25页 |
| 3.1.2 载体与菌株 | 第25页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第25-26页 |
| 3.1.4 实验试剂 | 第26页 |
| 3.1.5 主要溶液配制 | 第26-28页 |
| 3.2 实验方法 | 第28-34页 |
| 3.2.1 生物信息学分析网站及工具软件 | 第28页 |
| 3.2.2 家蚕Bmtol预测基因的筛选 | 第28-29页 |
| 3.2.3 引物设计 | 第29页 |
| 3.2.4 家蚕总RNA的提取 | 第29-30页 |
| 3.2.5 合成cDNA模板 | 第30页 |
| 3.2.6 cDNA模板检测 | 第30-31页 |
| 3.2.7 基因扩增 | 第31页 |
| 3.2.8 目的片段胶回收 | 第31-32页 |
| 3.2.9 目的片段与载体连接 | 第32页 |
| 3.2.10 转化 | 第32-33页 |
| 3.2.11 阳性克隆的筛选及验证 | 第33页 |
| 3.2.12 提取重组质粒 | 第33-34页 |
| 3.3 结果与分析 | 第34-46页 |
| 3.3.1 家蚕Bmtol基因芯片分析 | 第34-35页 |
| 3.3.2 cDNA模板进行Actin3检测 | 第35-36页 |
| 3.3.3 家蚕Bmtol基因的克隆 | 第36-37页 |
| 3.3.4 阳性克隆的初步筛选 | 第37-38页 |
| 3.3.5 重组质粒的提取 | 第38-39页 |
| 3.3.6 家蚕Bmtol基因的序列分析 | 第39页 |
| 3.3.7 家蚕BmTOL蛋白的信号肽预测 | 第39-40页 |
| 3.3.8 家蚕BmTOL蛋白的二级结构和三级结构预测 | 第40-42页 |
| 3.3.9 家蚕BmTOL蛋白的细胞定位预测 | 第42页 |
| 3.3.10 家蚕BmTOL蛋白亲疏水性分析 | 第42-43页 |
| 3.3.11 家蚕BmTOL蛋白跨膜结构域预测 | 第43-44页 |
| 3.3.12 家蚕BmTOL蛋白结构域预测 | 第44页 |
| 3.3.13 家蚕BmTOL的多序列比对 | 第44-46页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第46-49页 |
| 第四章 家蚕Bmtol基因的原核表达、蛋白纯化及抗体制备 | 第49-71页 |
| 4.1 实验材料与试剂 | 第49-55页 |
| 4.1.1 载体及菌株 | 第49页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第49-50页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第50-51页 |
| 4.1.4 主要溶液配制 | 第51-55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-59页 |
| 4.2.1 家蚕Bmtol基因表达片段的克隆 | 第55页 |
| 4.2.2 质粒提取 | 第55页 |
| 4.2.3 目的基因的克隆载体和表达载体双酶切 | 第55-56页 |
| 4.2.4 目的基因片段与载体片段连接 | 第56页 |
| 4.2.5 转化 | 第56页 |
| 4.2.6 阳性质粒的筛选和测序 | 第56页 |
| 4.2.7 质粒提取 | 第56页 |
| 4.2.8 Bmtol基因的原核表达 | 第56-58页 |
| 4.2.9 重组蛋白的纯化 | 第58-59页 |
| 4.2.10 重组蛋白的浓缩 | 第59页 |
| 4.2.11 抗体制备 | 第59页 |
| 4.3 实验结果 | 第59-68页 |
| 4.3.1 Bmtol基因原核表达载体的构建 | 第59-62页 |
| 4.3.2 Bmtol基因重组载体的诱导表达 | 第62-64页 |
| 4.3.3 Bmtol基因的重组载体在不同IPTG浓度下诱导表达 | 第64-65页 |
| 4.3.4 重组蛋白的可溶性分析 | 第65-66页 |
| 4.3.5 重组蛋白的亲和层析纯化 | 第66-67页 |
| 4.3.6 蛋白浓缩 | 第67-68页 |
| 4.3.7 重组蛋白多克隆抗体制备 | 第68页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第68-71页 |
| 第五章 家蚕Bmtol基因的表达分析和功能研究 | 第71-85页 |
| 5.1 实验材料与试剂 | 第71-75页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第71页 |
| 5.1.2 实验仪器 | 第71-72页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第72-73页 |
| 5.1.4 主要溶液配制 | 第73-75页 |
| 5.2 实验方法 | 第75-78页 |
| 5.2.1 RNA的提取和cDNA模板的合成 | 第75页 |
| 5.2.2 RT-PCR检测家蚕Bmtol基因的表达 | 第75页 |
| 5.2.3 qPCR检测家蚕Bmtol基因在组织的表达量 | 第75-76页 |
| 5.2.4 Western Bolt检测 | 第76-77页 |
| 5.2.5 激素处理家蚕 | 第77页 |
| 5.2.6 免疫组化 | 第77-78页 |
| 5.3 实验结果 | 第78-84页 |
| 5.3.1 家蚕Bmtol基因时期表达特征分析 | 第78-79页 |
| 5.3.2 家蚕Bmtol基因组织表达特征分析 | 第79-80页 |
| 5.3.3 Western检测 | 第80页 |
| 5.3.4 激素处理后家蚕增重变化 | 第80-81页 |
| 5.3.5 激素处理后RT-PCR和qPCR检测 | 第81-83页 |
| 5.3.6 免疫组化 | 第83-84页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第84-85页 |
| 第六章 综合与讨论 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-95页 |
| 附录 | 第95-97页 |
| 在读期间发表的论文 | 第97-99页 |
| 致谢 | 第99页 |
