| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略表 | 第7-12页 |
| 一 引言 | 第12-24页 |
| 1.1 文献综述——植物细胞质抗坏血酸过氧化物酶1的研究进展 | 第12-23页 |
| 1.1.1 APX1的酶学特性 | 第12-15页 |
| 1.1.1.1 APX1的基本特性 | 第12-13页 |
| 1.1.1.2 APX1的结构特性 | 第13-14页 |
| 1.1.1.3 APX1的酶活性调节 | 第14-15页 |
| 1.1.2 植物APX1基因的表达调控 | 第15-18页 |
| 1.1.2.1 植物APX1基因的特点 | 第15-16页 |
| 1.1.2.2 植物APX1基因的诱导表达 | 第16页 |
| 1.1.2.3 植物APX1基因表达的转录调控 | 第16-17页 |
| 1.1.2.4 植物APX1基因表达的转录后调控 | 第17-18页 |
| 1.1.3 植物APX1的生物学作用 | 第18-20页 |
| 1.1.3.1 调控胞内氧化还原态水平 | 第18-19页 |
| 1.1.3.2 参与植物抗逆普适性及抗交叉胁迫 | 第19页 |
| 1.1.3.3 保护细胞器和基因组 | 第19-20页 |
| 1.1.4 植物APX1的应用 | 第20-23页 |
| 1.1.4.1 APX1在植物抗逆基因工程中的应用 | 第20-22页 |
| 1.1.4.2 APX1的其它应用 | 第22-23页 |
| 1.2 本论文的研究目的及意义 | 第23-24页 |
| 二 材料与方法 | 第24-44页 |
| 2.1 材料 | 第24-31页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24-25页 |
| 2.1.2 菌种和质粒 | 第25页 |
| 2.1.3 工具酶和试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.3.1 工具酶 | 第25页 |
| 2.1.3.2 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.4 引物 | 第26-27页 |
| 2.1.5 试剂配制 | 第27-30页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-44页 |
| 2.2.1 APX1基因的克隆 | 第31-38页 |
| 2.2.1.1 RNA的提取 | 第31页 |
| 2.2.1.2 RNA电泳 | 第31-32页 |
| 2.2.1.3 反转录合成c DNA | 第32页 |
| 2.2.1.4 APX1基因的扩增 | 第32-33页 |
| 2.2.1.5 DNA琼脂糖凝胶电泳纯化回收目的片段 | 第33-34页 |
| 2.2.1.6 PCR产物及载体的酶切 | 第34-35页 |
| 2.2.1.6.1 JcAPX1和AtAPX1的酶切 | 第34页 |
| 2.2.1.6.2 DNA酶切产物的溶液纯化 | 第34页 |
| 2.2.1.6.3 载体pET32a(+)的酶切 | 第34-35页 |
| 2.2.1.7 DNA连接和转化 | 第35-36页 |
| 2.2.1.7.1 连接 | 第35页 |
| 2.2.1.7.2 转化 | 第35-36页 |
| 2.2.1.7.2.1 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第35页 |
| 2.2.1.7.2.2 大肠杆菌DNA转化 | 第35-36页 |
| 2.2.1.8 重组子的筛选 | 第36页 |
| 2.2.1.9 重组质粒p ET(Jc APX1)和p ET(At APX1)的提取和测序 | 第36-38页 |
| 2.2.1.9.1 质粒DNA提取 | 第36-37页 |
| 2.2.1.9.2 菌种的保存 | 第37-38页 |
| 2.2.1.9.3 测序 | 第38页 |
| 2.2.2 生物信息学分析 | 第38页 |
| 2.2.3 融合表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 2.2.3.1 接头酶切片段的制备 | 第38页 |
| 2.2.3.2 重组载体酶切片段的制备 | 第38-39页 |
| 2.2.3.2.1 重组载体的酶切 | 第38-39页 |
| 2.2.3.2.2 重组载体的快速去磷酸化 | 第39页 |
| 2.2.3.3 接头与重组载体片段的连接及转化 | 第39页 |
| 2.2.3.4 重组子的筛选及质粒提取 | 第39页 |
| 2.2.3.5 重组质粒转化BL21(DE3)感受态 | 第39页 |
| 2.2.4 APX1及其融合蛋白的诱导表达和热稳定性分析 | 第39-42页 |
| 2.2.4.1 APX1及其融合蛋白的诱导表达 | 第39页 |
| 2.2.4.2 菌液的超声裂解 | 第39-40页 |
| 2.2.4.3 APX1及其融合蛋白样品的温度梯度处理 | 第40页 |
| 2.2.4.4 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第40-42页 |
| 2.2.4.4.1 SDS-PAGE胶的制备 | 第40-41页 |
| 2.2.4.4.2 上样电泳 | 第41页 |
| 2.2.4.4.3 蛋白胶快速染色及脱色 | 第41-42页 |
| 2.2.5 APX1及其融合蛋白的胶活性染色 | 第42页 |
| 2.2.5.1 样品制备 | 第42页 |
| 2.2.5.2 非变性PAGE胶的配制及电泳 | 第42页 |
| 2.2.5.3 APX1及其融合蛋白的胶活性染色 | 第42页 |
| 2.2.6 分光光度法测定APX1及其融合蛋白的酶活性 | 第42-44页 |
| 2.2.6.1 样品制备 | 第42-43页 |
| 2.2.6.2 酶活测定 | 第43页 |
| 2.2.6.3 蛋白条带灰度值分析 | 第43-44页 |
| 三 结果与分析 | 第44-59页 |
| 3.1 APX1基因的克隆 | 第44-48页 |
| 3.1.1 JcAPX1基因克隆 | 第44-46页 |
| 3.1.1.1 JcAPX1基因扩增 | 第44页 |
| 3.1.1.2 JcAPX1 PCR产物及载体pET32a(+)的酶切 | 第44-45页 |
| 3.1.1.3 pET(JcAPX1)阳性重组子的鉴定及质粒提取 | 第45-46页 |
| 3.1.2 AtAPX1基因的克隆 | 第46-48页 |
| 3.1.2.1 AtAPX1基因扩增 | 第46页 |
| 3.1.2.2 AtAPX1 PCR产物及载体pET32a(+)的酶切 | 第46-47页 |
| 3.1.2.3 pET(AtAPX1)阳性重组子的鉴定及质粒提取 | 第47-48页 |
| 3.2 APX1的生物信息学分析 | 第48-51页 |
| 3.2.1 JcAPX1的生物信息学分析 | 第48-50页 |
| 3.2.1.1 JcAPX1基因的序列分析 | 第48-49页 |
| 3.2.1.2 JcAPX1蛋白的保守结构域预测 | 第49页 |
| 3.2.1.3 JcAPX1蛋白的系统进化树分析 | 第49-50页 |
| 3.2.2 AtAPX1基因的序列分析 | 第50-51页 |
| 3.3 APX1融合表达载体的构建 | 第51-54页 |
| 3.3.1 接头的选择和克隆 | 第51-53页 |
| 3.3.2 pET(APX1-X)融合表达载体的构建 | 第53-54页 |
| 3.4 JcAPX1及其融合蛋白的热稳定性分析 | 第54-55页 |
| 3.5 JcAPX1及其融合蛋白的酶活性分析 | 第55-57页 |
| 3.6 AtAPX1及其融合蛋白的热稳定性及酶活性分析 | 第57-59页 |
| 四 总结与讨论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文和研究成果 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
