| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 缩略词表（Abbreviations） | 第11-16页 |
| 前言 | 第16-17页 |
| 第一篇 文献综述 | 第17-28页 |
| 1.1 卵泡的发育 | 第17-19页 |
| 1.1.1 哺乳动物的卵泡发育 | 第17页 |
| 1.1.2 禽类的卵泡发育 | 第17-18页 |
| 1.1.3 禽类的卵泡分类 | 第18-19页 |
| 1.2 Hippo信号通路 | 第19-25页 |
| 1.2.1 Hippo Pathway的发现 | 第19-21页 |
| 1.2.2 Hippo Pathway研究进展 | 第21-25页 |
| 1.3 立题依据 | 第25页 |
| 1.4 研究方案及方法 | 第25-28页 |
| 第二篇 研究内容 | 第28-94页 |
| 第一章 鸡MST4、SAV1、LATS1、MOB2和YAP1基因在卵泡中的mRNA表达 | 第28-42页 |
| 引言 | 第28页 |
| 1.1 实验材料 | 第28-30页 |
| 1.1.1 研究对象 | 第28-29页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第29页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第29页 |
| 1.1.4 相关溶液配制 | 第29-30页 |
| 1.2 实验方法 | 第30-33页 |
| 1.2.1 动物模型的建立 | 第30页 |
| 1.2.2 组织取样及保存 | 第30页 |
| 1.2.3 引物的设计与合成 | 第30-31页 |
| 1.2.4 RNA抽提 | 第31页 |
| 1.2.5 反转录成cDNA | 第31-32页 |
| 1.2.6 荧光定量PCR反应步骤 | 第32页 |
| 1.2.7 数据处理 | 第32-33页 |
| 1.3 实验结果与分析 | 第33-39页 |
| 1.3.1 RNA电泳检测结果 | 第33页 |
| 1.3.2 定性PCR检测目的基因的表达情况 | 第33-34页 |
| 1.3.3 荧光定量PCR定量方法的建立 | 第34-35页 |
| 1.3.4 MST4、SAV1、LATS1、MOB2、YAP1和 18S基因的扩增曲线和熔解曲线 | 第35页 |
| 1.3.5 荧光定量PCR结果 | 第35-39页 |
| 1.4 讨论 | 第39-41页 |
| 1.5 小结 | 第41-42页 |
| 第二章 鸡MST4、SAV1、MOB2、LATS1和YAP1蛋白在卵巢中的时空表达模式 | 第42-51页 |
| 引言 | 第42页 |
| 2.1 实验材料 | 第42-44页 |
| 2.1.1 研究对象 | 第42页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第42-43页 |
| 2.1.3 免疫组化实验相关试剂 | 第43-44页 |
| 2.1.4 抗体选用 | 第44页 |
| 2.1.5 实验分析软件 | 第44页 |
| 2.2 实验方法 | 第44-46页 |
| 2.2.1 动物模型的建立 | 第44页 |
| 2.2.2 组织取样及保存 | 第44页 |
| 2.2.3 石蜡切片的制作 | 第44-45页 |
| 2.2.4 免疫组化DAB染色 | 第45-46页 |
| 2.2.5 图像分析 | 第46页 |
| 2.3 结果与分析 | 第46-48页 |
| 2.4 讨论 | 第48-50页 |
| 2.5 小结 | 第50-51页 |
| 第三章 MST4、SAV1、LATS1、MOB2和YAP1互作关系的检测、鉴定 | 第51-62页 |
| 引言 | 第51页 |
| 3.1 实验材料 | 第51-54页 |
| 3.1.1 研究对象 | 第51页 |
| 3.1.2 相关试剂 | 第51-52页 |
| 3.1.3 主要试剂配制 | 第52页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第52-53页 |
| 3.1.5 抗体 | 第53-54页 |
| 3.2 实验方法 | 第54-57页 |
| 3.2.1 鸡前等级卵泡颗粒细胞的分离培养 | 第54页 |
| 3.2.2 免疫共沉淀检测互作关系 | 第54-55页 |
| 3.2.3 Western blotting检测蛋白间的互作关系 | 第55-57页 |
| 3.3 结果 | 第57-60页 |
| 3.3.1 鸡前等级卵泡颗粒细胞的分离培养 | 第57-58页 |
| 3.3.2 MST4、SAV1、LATS1、MOB2和YAP1之间互作关系检测 | 第58-60页 |
| 3.4 讨论 | 第60-61页 |
| 3.5 小结 | 第61-62页 |
| 第四章 过表达MST4基因对Hippo/MST信号通路其他成员的影响 | 第62-76页 |
| 引言 | 第62页 |
| 4.1 实验材料 | 第62-64页 |
| 4.1.1 研究对象 | 第62页 |
| 4.1.2 相关试剂 | 第62-64页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第64页 |
| 4.1.4 抗体 | 第64页 |
| 4.2 实验方法 | 第64-69页 |
| 4.2.1 引物设计与合成 | 第64-65页 |
| 4.2.2 鸡前等级卵泡颗粒细胞的分离培养 | 第65页 |
| 4.2.3 过表达MST4实验 | 第65-69页 |
| 4.2.4 RT-PCR验证基因间互作关系 | 第69页 |
| 4.2.5 Western blotting实验验证基因间互作关系 | 第69页 |
| 4.3 结果与分析 | 第69-74页 |
| 4.3.1 pcDNA3.1- FLAG-MST4真核表达质粒构建 | 第69-71页 |
| 4.3.2 过表达MST4实验的凝胶电泳结果 | 第71-72页 |
| 4.3.3 过表达实验RT-PCR结果 | 第72-73页 |
| 4.3.4 Western blotting结果 | 第73-74页 |
| 4.4 讨论 | 第74-75页 |
| 4.5 小结 | 第75-76页 |
| 第五章 SAV1基因siRNA干扰对Hippo/MST信号通路其他成员的影响 | 第76-81页 |
| 引言 | 第76页 |
| 5.1 实验材料 | 第76页 |
| 5.2 实验方法 | 第76-78页 |
| 5.2.1 引物设计与合成 | 第76页 |
| 5.2.2 siRNA干扰SAV1基因 | 第76-77页 |
| 5.2.3 RT-PCR验证基因间互作关系 | 第77-78页 |
| 5.3 结果与分析 | 第78-80页 |
| 5.3.1 siRNA的筛选 | 第78页 |
| 5.3.2 siRNA基因siRNA后对MOB2、LATS1和YAP1基因表达水平的影响 | 第78-80页 |
| 5.4 讨论 | 第80页 |
| 5.5 小结 | 第80-81页 |
| 第六章 SAV1抑制鸡前等级卵泡生长发育的作用 | 第81-94页 |
| 引言 | 第81页 |
| 6.1 实验材料 | 第81-83页 |
| 6.1.1 研究对象 | 第81-82页 |
| 6.1.2 相关试剂 | 第82页 |
| 6.1.3 实验仪器 | 第82页 |
| 6.1.4 抗体信息 | 第82页 |
| 6.1.5 表达载体引物信息 | 第82-83页 |
| 6.2 实验方法 | 第83-85页 |
| 6.2.1 引物的设计与合成 | 第83-84页 |
| 6.2.2 鸡前等级卵泡颗粒细胞的分离培养 | 第84页 |
| 6.2.3 免疫共沉淀检测互作关系 | 第84页 |
| 6.2.4 Western blotting检测蛋白间的互作关系 | 第84页 |
| 6.2.5 细胞转染 | 第84页 |
| 6.2.6 siRNA干扰SAV1基因 | 第84-85页 |
| 6.2.7 磷酸化分析 | 第85页 |
| 6.3 结果与分析 | 第85-91页 |
| 6.3.1 免疫共沉淀检测SAV1与MST1和MST2之间的相互作用 | 第85页 |
| 6.3.2 GST pull-down检测SAV1与Hippo信号通路中其他成员互作 | 第85-86页 |
| 6.3.3 MST1和MST2磷酸化SAV1 | 第86-87页 |
| 6.3.4 SAV1磷酸化LATS1 | 第87-88页 |
| 6.3.5 siRNA干扰SAV1对颗粒细胞增殖的影响 | 第88-90页 |
| 6.3.6 SAV1过表达后对颗粒细胞增殖的影响 | 第90-91页 |
| 6.4 讨论 | 第91-93页 |
| 6.5 小结 | 第93-94页 |
| 结论 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-106页 |
| 附录 | 第106-112页 |
| 作者简介 | 第112-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
