| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第13-22页 |
| 第一章 猪腺病毒简介及腺病毒包装细胞系的研究 | 第13-22页 |
| 1.1 腺病毒及猪腺病毒简介 | 第13-14页 |
| 1.1.1 腺病毒及猪腺病毒结构特点 | 第13-14页 |
| 1.1.2 猪腺病毒的诊断 | 第14页 |
| 1.2 腺病毒及猪腺病毒载体疫苗研究进展 | 第14-17页 |
| 1.3 腺病毒包装细胞系研究进展 | 第17-20页 |
| 1.3.1 猪腺病毒的基因组特点及功能 | 第17-19页 |
| 1.3.2 腺病毒包装细胞系介绍 | 第19-20页 |
| 1.4 细胞系建立技术 | 第20-22页 |
| 1.4.1 细胞系建立方法 | 第20-21页 |
| 1.4.2 建立细胞系的作用 | 第21-22页 |
| 实验研究 | 第22-51页 |
| 第二章 稳定表达PAdV-3 E1Blarge和I-Sce I蛋白慢病毒的包装 | 第22-38页 |
| 2.1 材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 载体、细胞、菌株 | 第22-23页 |
| 2.1.2 酶、抗体 | 第23页 |
| 2.1.3 主要药品及试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第23-25页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第25页 |
| 2.2 方法 | 第25-33页 |
| 2.2.1 pTrip-CMV-3HA-3NLS-ISceI-2A-IRES-Hygro重组质粒的构建及鉴定 | 第25-27页 |
| 2.2.2 pTrip-3HA-3NLS-ISceI-2A-His-E1Blarge-IRES-Hygro重组质粒的构建 | 第27-29页 |
| 2.2.3 慢病毒包装 | 第29-31页 |
| 2.2.4 慢病毒滴度测定 | 第31页 |
| 2.2.5 慢病毒转导 | 第31-32页 |
| 2.2.6 重组慢病毒验证 | 第32-33页 |
| 2.3 结果 | 第33-36页 |
| 2.3.1 PCR扩增构建穿梭质粒所用的目的片段 | 第33-34页 |
| 2.3.2 pTrip-3HA-3NLS-ISceI-2A-His-E1Blarge-IRES-Hygro载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.3.3 重组慢病毒Lenti-3HA-3NLS-ISceI-2A-His-E1Blarge-IRES-Hygro的获得 | 第35-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-37页 |
| 2.5 小结 | 第37-38页 |
| 第三章 稳定表达PAdV-3 E1Blarge和I-Sce I蛋白的重组ST细胞株 | 第38-43页 |
| 3.1 材料 | 第38-39页 |
| 3.1.1 细胞：HEK 293T、ST-E1细胞（含有HAdV-5 E1基因）均由本实验保存提供 | 第38页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第38页 |
| 3.1.3 抗体、嘌呤霉素、潮霉素 | 第38页 |
| 3.1.4 溶液配制 | 第38-39页 |
| 3.1.5 主要仪器 | 第39页 |
| 3.2 方法 | 第39-40页 |
| 3.2.1 嘌呤霉素纯化已筛选表达HAdV-5 E1基因的ST细胞（ST-E1） | 第39页 |
| 3.2.2 慢病毒转导ST-E1细胞 | 第39页 |
| 3.2.3 潮霉素筛选及western blot检测I-Sce I和PAdV-3 E1Blarge蛋白的稳定表达 | 第39-40页 |
| 3.3 结果 | 第40-41页 |
| 3.3.1 重组ST细胞系中I-Sce I和PAdV-3 E1Blarge蛋白的表达 | 第40-41页 |
| 3.3.2 重组ST细胞系中I-Sce I和PAdV-3 E1Blarge蛋白表达的稳定性 | 第41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-42页 |
| 3.5 小结 | 第42-43页 |
| 第四章 ST-E1-E1Blarge-ISceI细胞株PAdV-3 包装和增殖能力评价 | 第43-51页 |
| 4.1 材料 | 第43-44页 |
| 4.1.1 细胞、病毒、基因组 | 第43页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第43页 |
| 4.1.3 主要溶液配制 | 第43-44页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第44页 |
| 4.2 方法 | 第44-46页 |
| 4.2.1 检测ST-E1-E1Blarge-ISceI细胞和VR1BL细胞拯救PAdV-3 ΔE1的能力 .. 32 | 第44-45页 |
| 4.2.2 检测PAdV-3 ΔE1在ST-E1-E1Blarge-ISceI细胞和VR1BL细胞上感染和增殖能力 | 第45-46页 |
| 4.3 结果 | 第46-49页 |
| 4.3.1 ST-E1-E1Blarge-ISceI细胞和VR1BL细胞拯救PAdV-3 ΔE1能力比较 | 第46-47页 |
| 4.3.2 PAdV-3 ΔE1在ST-E1-E1Blarge-ISceI细胞和VR1BL细胞上的感染增殖能力 | 第47-49页 |
| 4.4 讨论 | 第49-50页 |
| 4.5 小结 | 第50-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
