| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 PEDV概述 | 第10-17页 |
| 1.1.1 PEDV的危害 | 第10页 |
| 1.1.2 PEDV致病机理 | 第10-11页 |
| 1.1.3 PEDV分子结构特征及结构蛋白功能 | 第11-12页 |
| 1.1.4 PEDV细胞培养 | 第12-13页 |
| 1.1.5 PEDV的诊断 | 第13-16页 |
| 1.1.6 亚洲地区PEDV疫苗的研究 | 第16-17页 |
| 1.2 酵母双杂交技术概述 | 第17-19页 |
| 1.2.1 酵母双杂交技术的原理 | 第17-18页 |
| 1.2.2 酵母双杂交技术的优势 | 第18页 |
| 1.2.3 酵母双杂交技术的局限性 | 第18-19页 |
| 1.2.4 酵母双杂交技术的延伸 | 第19页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第19-22页 |
| 第2章 诱饵载体pGBKT7-N的构建和其毒性、自激活效应检测 | 第22-30页 |
| 2.1 前言 | 第22页 |
| 2.2 材料 | 第22-24页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第22页 |
| 2.2.2 试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.3 培养基及试剂配制 | 第23页 |
| 2.2.4 仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.3 方法 | 第24-27页 |
| 2.3.1 诱饵载体pGBKT7-N的构建 | 第24-26页 |
| 2.3.2 重组质粒pGBKT7-N转化Y2H Gold感受态 | 第26页 |
| 2.3.3 重组质粒pGBKT7-N对酵母细胞毒性以及自激活性的检测 | 第26-27页 |
| 2.4 结果 | 第27-28页 |
| 2.4.1 PCR扩增N目的基因 | 第27页 |
| 2.4.2 诱饵质粒pGBKT7-N的菌液PCR鉴定 | 第27-28页 |
| 2.4.3 诱饵蛋白自激活与毒性检测 | 第28页 |
| 2.5 讨论 | 第28-30页 |
| 第3章 酵母双杂交法筛选与PEDV N蛋白相互作用的蛋白 | 第30-40页 |
| 3.1 前言 | 第30页 |
| 3.2 材料 | 第30-31页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第30-31页 |
| 3.2.2 试剂 | 第31页 |
| 3.2.3 培养基及配制 | 第31页 |
| 3.2.4 仪器设备 | 第31页 |
| 3.3 方法 | 第31-33页 |
| 3.3.1 pGBKT7-N质粒转化Y2H Gold酵母感受态细胞 | 第31页 |
| 3.3.2 pGBKT7-N重组Y2H Gold酵母菌与猪肺泡巨噬细胞文库酵母菌融合 | 第31-32页 |
| 3.3.3 酵母双杂交筛选PEDV N蛋白互作的宿主蛋白 | 第32页 |
| 3.3.4 LGALS3和SNRPG蛋白回返实验和自激活实验 | 第32页 |
| 3.3.5 Co-IP验证PEDV N蛋白与LGALS3、SNRPG的相互作用 | 第32-33页 |
| 3.4 结果 | 第33-37页 |
| 3.4.1 pGBKT7-N质粒转化Y2H Gold酵母感受态细胞 | 第33-34页 |
| 3.4.2 酵母双杂交筛选阳性菌 | 第34页 |
| 3.4.3 酵母双杂交筛选PEDV N蛋白互作的宿主蛋白 | 第34页 |
| 3.4.4 回返和自激活实验验证N蛋白与LGALS3、SNRPG的相互作用 | 第34-36页 |
| 3.4.5 Co-IP验证PEDV N蛋白与LGALS3、SNRPG的相互作用 | 第36-37页 |
| 3.5 讨论 | 第37-40页 |
| 第4章 PEDV N蛋白抗原表位鉴定 | 第40-51页 |
| 4.1 前言 | 第40页 |
| 4.2 材料 | 第40-41页 |
| 4.2.1 菌种、质粒和细胞 | 第40页 |
| 4.2.2 主要试剂及试剂盒 | 第40-41页 |
| 4.2.3 仪器设备 | 第41页 |
| 4.3 方法 | 第41-47页 |
| 4.3.1 N蛋白单克隆抗体腹水制备 | 第41页 |
| 4.3.2 N区域表位鉴定 | 第41-44页 |
| 4.3.3 N1-N2区域表位鉴定 | 第44-47页 |
| 4.4 结果 | 第47-49页 |
| 4.4.1 N蛋白单克隆抗体腹水制备 | 第47页 |
| 4.4.2 N区分段表位鉴定 | 第47-48页 |
| 4.4.3 N1-N2区分段表位鉴定 | 第48-49页 |
| 4.5 讨论 | 第49-51页 |
| 第5章 结论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 缩略语词汇表 | 第60-61页 |
| 附录Ⅰ OMEGA Gel Extraction Kit具体步骤 | 第61-62页 |
| 附录Ⅱ OMEGA Gel Extraction Kit具体步骤 | 第62-63页 |
| 附录Ⅲ Western blot实验步骤 | 第63页 |
| 附录Ⅳ 质粒转化酵母感受态细胞步骤 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第66页 |
