| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-30页 |
| ·假单胞菌简介 | 第11页 |
| ·生防假单胞菌 | 第11-12页 |
| ·PGPR 的生防机理 | 第12-14页 |
| ·吩嗪的简介以及生物合成 | 第14-16页 |
| ·吩嗪合成的调控机制 | 第16-27页 |
| ·双组份调控系统 | 第16-25页 |
| ·GacS/GacA 双组份全局调控系统 | 第17-19页 |
| ·RetS 和LadS | 第19-25页 |
| ·温度作为外界环境信号对微生物次级代谢产物产生的影响 | 第25-27页 |
| ·研究意义和主要内容 | 第27-30页 |
| ·研究的意义 | 第27-28页 |
| ·研究的内容 | 第28-30页 |
| 第二章 材料和方法 | 第30-36页 |
| ·培养基 | 第30页 |
| ·菌株培养条件和保藏 | 第30页 |
| ·抗生素的储备浓度和使用浓度 | 第30-31页 |
| ·DNA 常规操作技术 | 第31页 |
| ·大肠杆菌和假单胞菌感受态细胞的制备和转化 | 第31-32页 |
| ·基于限制性内切酶和连接酶的质粒构建 | 第32-33页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性的测定[85] | 第33-35页 |
| ·PCA 和 PYO 的定量分析 | 第35-36页 |
| 第三章 铜绿假单胞菌M18 中retS 基因的鉴定及其功能的研究 | 第36-57页 |
| ·材料和方法 | 第36-44页 |
| ·本实验所用菌株和质粒及其来源见表2 | 第36-37页 |
| ·铜绿假单胞菌M18 中retS 基因突变株M18RS 的构建 | 第37-39页 |
| ·retS 基因的克隆 | 第37-38页 |
| ·突变质粒构建 | 第38页 |
| ·双亲杂交构建retS 基因突变菌株 M18RS | 第38-39页 |
| ·反式回补质粒pME6000-retS 的构建 | 第39-40页 |
| ·5’RACE 方法确定铜绿假单胞菌 M18 中 phzA2-G2 基因簇第二个 转录起始位点 | 第40-44页 |
| ·5’RCE 的原理 | 第40-41页 |
| ·5’RCE 的具体步骤 | 第41-44页 |
| ·ph22-lacZ 的分段转录融合构建 | 第44页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性测定和吩嗪-1-羧酸以及绿脓菌素的测定 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-57页 |
| ·M18 中retS 基因突变株的构建 | 第44-45页 |
| ·retS 基因突变导致在不同温度下对吩嗪-1-羧酸的调控方式不同 | 第45-48页 |
| ·反式回补实验进一步证明RetS 的基因调控功能 | 第48-49页 |
| ·retS 基因在不同温度下对phzA2-G2 基因簇在转录和翻译水平的调控 | 第49-53页 |
| ·铜绿假单胞菌M18 中phzA2-G2 基因簇第二个转录起始位点的确定 | 第49-50页 |
| ·retS 基因在不同温度下对phzA2-G2 基因簇在转录水平的调控不明显 | 第50-52页 |
| ·retS 基因在不同温度下对phzA2-G2 基因簇的调控作用在翻译水平 | 第52-53页 |
| ·retS 基因在不同温度下对phzA1-G1 基因簇在转录和翻译水平的调控 | 第53-57页 |
| 第四章 RetS 在不同的温度下对PCA 具有的区别性调控与GacA 介导的通路有关 | 第57-66页 |
| ·材料和方法 | 第57-59页 |
| ·本实验所用的菌株和质粒以及来源见表3 | 第57页 |
| ·retSgacA 基因双突变株M18RSG 的构建 | 第57-58页 |
| ·过表达质粒pME6000-gacA 的构建 | 第58页 |
| ·gacA-lacZ 的翻译融合构建 | 第58页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性测定和吩嗪-1-羧酸的测定 | 第58-59页 |
| ·实验结果 | 第59-66页 |
| ·传感器RetS 通过GacA 介导的信号通路在不同温度下对PCA 进行区别性调控 | 第59-62页 |
| ·温度对gacA 基因的翻译水平有非常微小的影响 | 第62-63页 |
| ·gacA 基因在不同温度下对两个phz 基因簇在翻译水平的调控作用 | 第63-66页 |
| 第五章 LadS 和GacS 对吩嗪合成在不同温度下的调控 | 第66-72页 |
| ·材料和方法 | 第66-69页 |
| ·本实验所用的菌株和质粒以及来源见表4 | 第66页 |
| ·ladS 基因和gacS 基因的无缝删除突变株的构建 | 第66-69页 |
| ·基因组片段的扩增 | 第66-67页 |
| ·上游和下游片段的扩增链接 | 第67-68页 |
| ·突变质粒的构建 | 第68页 |
| ·双亲杂交获得删除突变菌株M18LS 和M18GS | 第68-69页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性测定和吩嗪-1-羧酸以及绿脓菌素的测定 | 第69页 |
| ·结果分析 | 第69-72页 |
| ·M18LS 和M18GS 删除突变株构建 | 第69-70页 |
| ·M18LS 和M18GS 突变株对吩嗪合成的调控方式与温度有关 | 第70-72页 |
| 第六章 讨论与展望 | 第72-76页 |
| 参考文献 | 第76-85页 |
| 致谢 | 第85-87页 |
| 攻读硕士期间论文发表情况及所获奖励 | 第87页 |
