摘要 | 第1-9页 |
ABSTRACT | 第9-10页 |
综述 | 第10-23页 |
1 GPV 病原学 | 第11-15页 |
·GPV 的分类学地位 | 第11页 |
·GPV 形态与理化特性 | 第11-12页 |
·GPV 的培养特性 | 第12页 |
·GPV 的分子生物学 | 第12-14页 |
·GPV 的流行病学 | 第14页 |
·GPV 的临床症状 | 第14页 |
·GPV 病理剖检 | 第14-15页 |
2 GPV 的防治 | 第15-17页 |
·GPV 弱毒苗 | 第15页 |
·GPV 灭活苗 | 第15-16页 |
·GPV 基因工程疫苗 | 第16页 |
·GPV 抗血清 | 第16页 |
·GPV 卵黄抗体 | 第16页 |
·GPV 单抗 | 第16-17页 |
3 小鹅瘟病诊断技术 | 第17-19页 |
·免疫学诊断法 | 第17-19页 |
·分子生物学诊断方法 | 第19页 |
4 以单克隆抗体为核心建立的免疫荧光技术在GPV 检测中的应用 | 第19-22页 |
·单克隆抗体技术 | 第19-21页 |
·免疫荧光技术检测方面的优势 | 第21-22页 |
5 研究目的和研究内容 | 第22-23页 |
第一章 抗GPV 杂交瘤细胞的复苏和单抗制备 | 第23-30页 |
1 材料与方法 | 第23-25页 |
·病毒和杂交瘤细胞株 | 第23页 |
·实验动物 | 第23-24页 |
·主要试剂 | 第24页 |
·常用试剂的配制(见附录1) | 第24页 |
·主要仪器和设备(见附录2) | 第24页 |
·杂交瘤细胞株的复苏 | 第24页 |
·细胞的冻存 | 第24页 |
·小鼠腹水的制备 | 第24-25页 |
·冰冻切片的准备 | 第25页 |
·间接免疫荧光试验(IFA) | 第25页 |
·腹水特性分析 | 第25页 |
2 结果 | 第25-27页 |
·杂交瘤细胞株的复苏 | 第25-26页 |
·GPV 单抗IFA 效价测定 | 第26页 |
·GPV 单抗特异性 | 第26-27页 |
3 结论 | 第27页 |
4 讨论 | 第27-30页 |
·影响杂交瘤细胞复苏的因素 | 第27-28页 |
·影响腹水产量和质量的因素 | 第28-30页 |
第二章 GPV 单抗的荧光标记及直接荧光诊断方法的建立 | 第30-39页 |
1 材料与方法 | 第30-32页 |
·病毒和单抗 | 第30-31页 |
·主要试剂及其配制 | 第31页 |
·FITC 单抗的研制 | 第31页 |
·病毒感染细胞板的制备 | 第31页 |
·感染组织冰冻切片的制备 | 第31页 |
·间接免疫荧光试验(IFA) | 第31-32页 |
·直接免疫荧光试验(DFA) | 第32页 |
·GPV 荧光抗体的特性测定 | 第32页 |
·DFA 与IFA 符合率比较 | 第32页 |
2 结果 | 第32-35页 |
·单抗的蛋白浓度 | 第32-33页 |
·荧光抗体的鉴定 | 第33-35页 |
·保存期测定 | 第35页 |
3. 结论 | 第35-36页 |
4 讨论 | 第36-39页 |
·影响标记的因素 | 第36-37页 |
·直接荧光法与其它检测小鹅瘟常用方法的比较 | 第37-39页 |
第三部分 应用DFA 检测GPV 在番鸭体内的动态分布 | 第39-45页 |
1 材料与方法 | 第39-40页 |
·病毒和试剂 | 第39-40页 |
·常用试剂的配制(见附录1) | 第40页 |
·主要仪器和设备(见附录2) | 第40页 |
·GPV 人工感染试验 | 第40页 |
·感染组织冰冻切片的制备 | 第40页 |
·直接免疫荧光(DFA)试验 | 第40页 |
2 结果 | 第40-44页 |
·临床症状与病理剖检 | 第40-41页 |
·DFA 检测GPV 在番鸭体内的动态分布 | 第41-42页 |
·DFA 检测GPV 在病死番鸭体内的分布 | 第42-43页 |
·DFA 检测GPV 在番鸭各个器官中的分布率 | 第43-44页 |
3 结论与讨论 | 第44-45页 |
·GPV 在各个组织中的分布规律 | 第44页 |
·DFA 检测 GPV 最佳靶器官 | 第44-45页 |
第四章 DFA、IFA 和VI 三种检测GPV 方法的比较 | 第45-54页 |
1 材料与方法 | 第45-47页 |
·病毒和抗体 | 第45-46页 |
·常用试剂的配制(见附录1) | 第46页 |
·主要仪器和设备(见附录2) | 第46页 |
·人工感染试验 | 第46页 |
·感染组织冰冻切片的制备 | 第46页 |
·间接免疫荧光试验(IFA) | 第46页 |
·直接免疫荧光试验(DFA) | 第46页 |
·病毒分离(VI) | 第46-47页 |
2 结果 | 第47-52页 |
·病毒分离(VI)结果 | 第47页 |
·DFA 和IFA 检测结果 | 第47-48页 |
·DFA、IFA 与VI 符合率的比较 | 第48-52页 |
3 讨论与分析 | 第52页 |
·DFA 和IFA 两种方法的比较 | 第52页 |
·DFA 和VI 两种方法的比较 | 第52页 |
4 结论 | 第52-54页 |
参考文献 | 第54-60页 |
附录1:常用试剂配制 | 第60-63页 |
1 HANK’S 液 | 第60-61页 |
2 0.8%生理盐水 | 第61页 |
3 PBS 溶液(0.02M PH7.4) | 第61页 |
4 4%EDTA 溶液(抗凝剂) | 第61页 |
5 CB 溶液(0.025M PH 9.0) | 第61-62页 |
6 CB 溶液(0. 5M PH 9.5) | 第62页 |
7 1%N_AN_3 | 第62页 |
8 冻存液的配制 | 第62页 |
9 考马斯亮兰G-250 染液 | 第62-63页 |
附录2:主要仪器设备 | 第63-64页 |
附录3 英文缩写词表 | 第64-66页 |
致谢 | 第66页 |