| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1 引言 | 第11-21页 |
| 1.1 流感病毒概述 | 第11页 |
| 1.2 流感病毒大流行 | 第11-12页 |
| 1.3 哺乳动物源H1N1流感病毒介绍 | 第12-13页 |
| 1.3.1 经典猪流感病毒H1N1(CS) | 第12页 |
| 1.3.2 欧亚类禽流感病毒H1N1 (EA) | 第12-13页 |
| 1.3.3 Pandemic/2009-like H1N1 | 第13页 |
| 1.3.4 人源H1N1流感病毒 | 第13页 |
| 1.4 流感病毒结构 | 第13-16页 |
| 1.4.1 病毒基因组结构 | 第13-14页 |
| 1.4.2 病毒RNA聚合酶 | 第14页 |
| 1.4.3 核蛋白 | 第14页 |
| 1.4.4 表面蛋白 | 第14-16页 |
| 1.4.5 基质蛋白 | 第16页 |
| 1.4.6 非结构蛋白 | 第16页 |
| 1.5 流感病毒抗原变异 | 第16-17页 |
| 1.6 流感病毒感染和复制 | 第17-18页 |
| 1.6.1 流感病毒的吸附、脱壳 | 第17页 |
| 1.6.2 流感病毒基因组的复制和转录 | 第17-18页 |
| 1.6.3 流感病毒的组装、出芽和释放 | 第18页 |
| 1.7 流感病毒出芽模型及相关蛋白 | 第18-19页 |
| 1.7.1 神经氨酸酶NA | 第18-19页 |
| 1.7.2 基质蛋白M1 | 第19页 |
| 1.8 研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-36页 |
| 2.1 试验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 病毒株与细胞 | 第21页 |
| 2.1.2 菌株与质粒载体 | 第21页 |
| 2.1.3 缓冲液与培养基 | 第21-23页 |
| 2.1.4 仪器与试剂 | 第23-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-36页 |
| 2.2.1 细胞复苏 | 第24页 |
| 2.2.2 细胞传代 | 第24-25页 |
| 2.2.3 H1N1病毒扩增 | 第25页 |
| 2.2.3.1 MDCK细胞铺板 | 第25页 |
| 2.2.3.2 病毒感染MDCK细胞 | 第25页 |
| 2.2.4 H1N1病毒RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.2.5 H1N1病毒cDNA制备 | 第26-27页 |
| 2.2.6 H1N1病毒基因PCR扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.7 扩增产物回收 | 第28-29页 |
| 2.2.8 酶切质粒载体与扩增产物 | 第29页 |
| 2.2.9 目的片段与载体连接 | 第29-30页 |
| 2.2.10 目的片段与载体同源重组 | 第30页 |
| 2.2.11 连接产物转化感受态细胞 | 第30-31页 |
| 2.2.12 菌落PCR鉴定 | 第31页 |
| 2.2.13 质粒中量提取 | 第31-32页 |
| 2.2.14 真核表达质粒表达能力鉴定 | 第32页 |
| 2.2.15 双分子荧光互补实验(BIFC) | 第32-33页 |
| 2.2.15.1 细胞培养与质粒转染 | 第32-33页 |
| 2.2.15.2 细胞固定、染色与观察 | 第33页 |
| 2.2.16 体外出芽实验(VLP) | 第33-36页 |
| 2.2.16.1 细胞培养与质粒转染 | 第33页 |
| 2.2.16.2 VLP样品制备 | 第33-34页 |
| 2.2.16.3 聚丙烯酰胺凝胶配制 | 第34页 |
| 2.2.16.4 SDS-PAGE | 第34页 |
| 2.2.16.5 蛋白膜转印 | 第34-35页 |
| 2.2.16.6 Western Blotting | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-42页 |
| 3.1 病毒NA基因M1基因PCR扩增结果 | 第36页 |
| 3.2 质粒构建及表达鉴定结果 | 第36-37页 |
| 3.3 M1蛋白与NA蛋白相互作用结果 | 第37页 |
| 3.4 M1蛋白N端的160个氨基酸与NA相互作用结果 | 第37-39页 |
| 3.5 NA蛋白与M1蛋白出芽实验结果 | 第39-40页 |
| 3.6 NA蛋白与M1蛋白不同截段出芽实验结果 | 第40-42页 |
| 4 讨论 | 第42-45页 |
| 4.1 NA蛋白和M1蛋白单独出芽能力的差异 | 第42页 |
| 4.2 M1蛋白通过与NA蛋白的相互作用出芽 | 第42-43页 |
| 4.3 M1蛋白与NA相互作用的区域是N端1～160氨基酸残基 | 第43页 |
| 4.4 M1的1～20与140～160对M1稳定性重要作用 | 第43-45页 |
| 5 结论 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |
