| 英文缩略词表 | 第7-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第1章 前言 | 第13-19页 |
| 1.1 研究背景 | 第13-17页 |
| 1.1.1 遗传密码子扩充与非天然氨基酸 | 第13-14页 |
| 1.1.2 遗传密码子扩充在病毒学中的应用 | 第14-15页 |
| 1.1.3 CVB3简述 | 第15-17页 |
| 1.2 立题依据与研究目的 | 第17页 |
| 1.3 主要研究内容 | 第17-18页 |
| 1.4 研究意义 | 第18-19页 |
| 第2章 遗传密码子扩充系统的构建与表达 | 第19-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 菌种、细胞和质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 主要溶液的配制 | 第19-20页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 全基因合成MmBocRS和PyltRNA_(CUA) | 第21页 |
| 2.2.2 菌液复苏 | 第21页 |
| 2.2.3 质粒提取 | 第21-22页 |
| 2.2.4 MmBocRS-pcDNA3.1 质粒构建 | 第22-23页 |
| 2.2.5 MmBocRS-pcDNA3.1 质粒双酶切鉴定 | 第23页 |
| 2.2.6 MmBocRS-4tRNA质粒构建 | 第23-24页 |
| 2.2.7 MmBocRS-4tRNA系列质粒双酶切鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.8 HEK 293T细胞复苏与培养 | 第25页 |
| 2.2.9 瞬时转染HEK 293T细胞 | 第25-26页 |
| 2.2.10 Western Blot鉴定MmBoc RS的表达 | 第26页 |
| 2.2.11 实时定量PCR鉴定PyltRNA_(CUA)的表达 | 第26-27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-30页 |
| 2.3.1 MmBocRS-pcDNA3.1 酶切结果 | 第27页 |
| 2.3.2 MmBocRS-4tRNA系列质粒酶切鉴定结果 | 第27-28页 |
| 2.3.3 MmBocRS的Western Blot鉴定 | 第28页 |
| 2.3.4 PyltRNA_(CUA)的实时定量PCR鉴定 | 第28-30页 |
| 2.4 本章小结 | 第30-31页 |
| 第3章 遗传密码子扩充系统控制蛋白表达 | 第31-40页 |
| 3.1 实验材料 | 第31-33页 |
| 3.1.1 细胞和质粒 | 第31页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第31页 |
| 3.1.3 主要溶液的配制 | 第31-32页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第32-33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-34页 |
| 3.2.1 构建突变体pEGFP-N1-UAG | 第33页 |
| 3.2.2 MmBocRS-4tRNA系列质粒与pEGFP-N1-UAG进行共转染 | 第33-34页 |
| 3.2.3 Western Blot分析EGFP的表达 | 第34页 |
| 3.2.4 流式细胞术分析EGFP的表达 | 第34页 |
| 3.3 实验结果 | 第34-38页 |
| 3.3.1 成功构建pEGFP-N1-UAG | 第34-35页 |
| 3.3.2 质粒转染的镜下成像结果 | 第35-36页 |
| 3.3.3 质粒转染的Western Blot结果 | 第36-37页 |
| 3.3.4 质粒转染的流式结果 | 第37-38页 |
| 3.4 讨论 | 第38-39页 |
| 3.5 本章小结 | 第39-40页 |
| 第4章 遗传密码子扩充系统控制病毒表达 | 第40-53页 |
| 4.1 实验材料 | 第40-42页 |
| 4.1.1 细胞和质粒 | 第40页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第40-41页 |
| 4.1.3 主要溶液的配制 | 第41页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第41-42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-45页 |
| 4.2.1 CVB3突变体的构建 | 第42-43页 |
| 4.2.2 CVB3突变体的酶切鉴定 | 第43页 |
| 4.2.3 CVB3突变体与MmBocRS-4tRNA共转染 | 第43页 |
| 4.2.4 病毒传代 | 第43-44页 |
| 4.2.5 病毒基因序列的测定 | 第44-45页 |
| 4.2.6 实时定量PCR检测病毒的表达量 | 第45页 |
| 4.3 实验结果 | 第45-52页 |
| 4.3.1 成功构建CVB3突变体 | 第45页 |
| 4.3.2 镜下成像结果 | 第45-49页 |
| 4.3.3 实时定量PCR检测CVB3 | 第49-50页 |
| 4.3.4 CVB3基因组序列的测定 | 第50页 |
| 4.3.5 CVB3的生物信息学分析 | 第50-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52页 |
| 4.5 本章小结 | 第52-53页 |
| 第5章 遗传密码子扩充系统稳定细胞系的构建 | 第53-59页 |
| 5.1 实验材料 | 第53-55页 |
| 5.1.1 细胞和质粒 | 第53页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第53-54页 |
| 5.1.3 主要溶液的配制 | 第54页 |
| 5.1.4 实验仪器 | 第54-55页 |
| 5.2 实验方法 | 第55-56页 |
| 5.2.1 慢病毒表达载体的构建 | 第55页 |
| 5.2.2 慢病毒包装 | 第55-56页 |
| 5.2.3 Hela细胞的感染与筛选 | 第56页 |
| 5.2.4 Western Blot检测稳定细胞系的MmBoc RS表达 | 第56页 |
| 5.2.5 实时定量PCR检测稳定细胞系的PyltRNA表达 | 第56页 |
| 5.2.6 pEGFP-N1-UAG转染稳定细胞系 | 第56页 |
| 5.3 实验结果 | 第56-58页 |
| 5.3.1 重组慢病毒载体的鉴定 | 第56-57页 |
| 5.3.2 WesternBlot检测稳定细胞株中MmBoc RS的表达 | 第57页 |
| 5.3.3 实时定量PCR检测稳定细胞株中PyltRNA_(CUA)的表达 | 第57-58页 |
| 5.3.4 验证稳定细胞株插入非天然氨基酸的功能 | 第58页 |
| 5.4 本章小结 | 第58-59页 |
| 结论与讨论 | 第59-60页 |
| 附录 | 第60-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 个人简历 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
