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线粒体途径在葛根素拮抗铅诱导原代大鼠肾小管上皮细胞凋亡中的作用

中文摘要第10-12页
Abstract第12-13页
1 前言第14-21页
    1.1 铅的污染状况及毒性研究进展第14-15页
        1.1.1 铅的理化性质第14页
        1.1.2 铅的污染状况第14-15页
        1.1.3 铅的肾毒性研究进展第15页
    1.2 细胞凋亡研究进展第15-20页
        1.2.1 死亡受体途径第16页
        1.2.2 内质网应激途径第16-18页
        1.2.3 线粒体途径第18-20页
    1.3 葛根素的作用及研究进展第20-21页
        1.3.1 葛根素的理化性质第20页
        1.3.2 葛根素的药理学研究进展第20-21页
2 材料与方法第21-38页
    2.1 实验材料第21-22页
    2.2 主要试剂第22-23页
    2.3 主要仪器第23页
    2.4 相关实验试剂的配制第23-27页
        2.4.1 磷酸盐平衡液PBS的配制第23-24页
        2.4.2 消毒液酸液(次强酸)的配制第24页
        2.4.3 血清的处理第24页
        2.4.4 Calcein-AM和CoC_l2?6H_2O配制第24-25页
        2.4.5 硝酸铅毒液配制第25页
        2.4.6 DMEM-F12细胞培养基的配制与除菌第25页
        2.4.7 NaOH和HCl溶液配制第25页
        2.4.8 MTT溶液的配制第25页
        2.4.9 鼠尾胶原的制备第25-26页
        2.4.10 Western Blot相关溶液的配制第26-27页
    2.5 试验方法第27-38页
        2.5.1 SD大鼠肾小管上皮细胞原代培养及传代培养第27-29页
        2.5.2 实验分组第29页
        2.5.3 MTT法检测细胞存活率第29-30页
        2.5.4 流式细胞术检测细胞凋亡率第30页
        2.5.5 激光共聚焦显微技术检测MPTP开放程度第30-31页
        2.5.6 激光共聚焦显微技术检测线粒体断裂情况第31页
        2.5.7 荧光定量PCR第31-34页
        2.5.8 蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)第34-37页
        2.5.9 统计学分析第37-38页
3 结果与分析第38-60页
    3.1 PU最佳保护浓度的选择第38-39页
    3.2 相差显微镜观察PU拮抗Pb诱导细胞损伤的细胞形态学变化第39-40页
    3.3 流式细胞术检测PU拮抗Pb诱导细胞凋亡率的变化第40-42页
    3.4 流式细胞术检测细胞内ROS水平和比色法检测细胞内MDA含量第42-44页
    3.5 流式细胞术检测线粒体膜电位(Δψm)的变化第44-45页
    3.6 激光共聚焦显微技术检测线粒体通透性转换孔(MPTP)开放程度第45-47页
    3.7 激光共聚焦显微技术检测线粒体形态断裂(Mito-tracker Red染色)第47-49页
    3.8 Pb染毒以及添加PU共孵育后对Cyt-c蛋白表达量的影响第49-51页
    3.9 Pb染毒以及添加PU共孵育后对Cleaved caspase-9、Cleaved caspase-3 和CleavedPARP蛋白表达量的影响第51-53页
    3.10 Pb染毒以及添加PU共孵育后对细胞内ANT蛋白表达量和ATP水平的影响第53-56页
    3.11 Pb染毒以及添加PU共孵育后对细胞内Bcl-2 和Bax mRNA以及蛋白表达水平的影响第56-60页
        3.11.1 Pb染毒以及添加PU共孵育后对细胞内Bcl-2 和Bax mRNA表达水平的影响第56-58页
        3.11.2 Pb染毒以及添加PU共孵育后对细胞内Bcl-2 和Bax蛋白表达水平的影响第58-60页
4 讨论第60-64页
    4.1 铅浓度的选择第60-61页
    4.2 葛根素浓度的选择第61页
    4.3 葛根素与细胞凋亡第61-62页
    4.4 葛根素与线粒体凋亡途径第62-64页
5 结论第64-66页
参考文献第66-71页
致谢第71-72页
硕士期间论文发表情况第72页

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