中文摘要 | 第4-6页 |
abstract | 第6-8页 |
中英文缩略语表 | 第9-17页 |
第一章 绪论 | 第17-39页 |
1.1 植物逆境胁迫基本概念及其危害 | 第17-20页 |
1.1.1 植物稳态、逆境及驯化的基本概念 | 第17-18页 |
1.1.2 植物非生物胁迫危害全球粮食生产和安全 | 第18-20页 |
1.2 植物对非生物胁迫的反应 | 第20-23页 |
1.2.1 非生物胁迫的相对性 | 第20-21页 |
1.2.2 植物应对非生物胁迫的生理概况 | 第21-23页 |
1.3 植物进化的非生物胁迫的抗性机制 | 第23-25页 |
1.3.1 干旱胁迫及抗性机理 | 第23-24页 |
1.3.2 盐胁迫及抗性机理 | 第24页 |
1.3.3 低温胁及迫抗性机理 | 第24-25页 |
1.3.4 重金属胁迫及抗性机理 | 第25页 |
1.4 基因组学在植物非生物胁迫的应用 | 第25-29页 |
1.4.1 基于结构基因组的抗逆研究 | 第25-27页 |
1.4.2 基于功能基因组—转录组的抗逆研究 | 第27-28页 |
1.4.3 基于比较基因组的抗逆研究 | 第28页 |
1.4.4 基于宏基因组的抗逆研究 | 第28-29页 |
1.5 植物非生物胁迫的常规研究方法 | 第29-30页 |
1.6 植物非生物胁迫的重要功能蛋白 | 第30-33页 |
1.6.1 调控蛋白-转录因子 | 第30-31页 |
1.6.2 抗逆保护性蛋白 | 第31-32页 |
1.6.3 通道蛋白 | 第32-33页 |
1.7 增殖相关蛋白EBP1研究进展 | 第33-36页 |
1.7.1 EBP1蛋白的基本特征 | 第33页 |
1.7.2 EBP1蛋白的两种类型和功能 | 第33-35页 |
1.7.3 EBP1在动物和植物中的研究现状 | 第35-36页 |
1.8 盐生植物四翅滨藜研究现状 | 第36-37页 |
1.8.1 四翅滨藜基本特征 | 第36页 |
1.8.2 四翅滨藜及滨藜属物种抗逆研究进展 | 第36-37页 |
1.9 本研究的目的意义与技术路线 | 第37-39页 |
1.9.1 研究目的及意义 | 第37页 |
1.9.2 具体研究内容及流程 | 第37-39页 |
第二章 四翅滨藜EST分析及抗逆基因挖掘 | 第39-65页 |
2.1 本章引言 | 第39-40页 |
2.2 实验材料及仪器设备 | 第40-41页 |
2.2.1 植物材料、载体和菌株 | 第40页 |
2.2.2 使用试剂及酶 | 第40-41页 |
2.2.3 使用的仪器设备 | 第41页 |
2.3 实验方法 | 第41-45页 |
2.3.1 四翅滨藜培育及胁迫处理 | 第41页 |
2.3.2 四翅滨藜RNA提取及文库构建 | 第41-42页 |
2.3.3 cDNA文库PCR鉴定及测序 | 第42页 |
2.3.4 表达序列标签形成及处理 | 第42页 |
2.3.5 表达序列标签功能注释及分类 | 第42-43页 |
2.3.6 盐胁迫基因定量RT-PCR鉴定 | 第43-44页 |
2.3.7 表达序列标签EST-SSRs类型及分布 | 第44-45页 |
2.4 结果与分析 | 第45-60页 |
2.4.1 四翅滨藜cDNA文库质量评估 | 第45页 |
2.4.2 cDNA文库PCR及插入基因大小分布 | 第45-47页 |
2.4.3 cDNA文库表达序列标签形成及分析 | 第47-48页 |
2.4.4 表达序列标签基因注释及同源性分析 | 第48-49页 |
2.4.5 表达序列标签丰富基因分析 | 第49-50页 |
2.4.6 表达序列标签MIPS功能分类 | 第50-51页 |
2.4.7 表达序列标签GO功能分类及胁迫基因分析预测 | 第51-54页 |
2.4.8 盐胁迫相关基因预测及qRT-PCR分析 | 第54-59页 |
2.4.9 ESTs-SSRs鉴定及分析 | 第59-60页 |
2.5 预测的抗逆基因在真核生物中的应用 | 第60-62页 |
2.6 本章总结 | 第62-65页 |
第三章 多用途植物表达载体体系的建立及应用 | 第65-89页 |
3.1 本章引言 | 第65-67页 |
3.2 实验材料 | 第67-70页 |
3.2.1 实验载体和菌株 | 第67页 |
3.2.2 实验酶类、试剂及药品 | 第67-68页 |
3.2.3 实验设备及仪器 | 第68页 |
3.2.4 本章主要引物 | 第68-69页 |
3.2.5 载体体系构建方案 | 第69-70页 |
3.2.6 植物材料及培养条件 | 第70页 |
3.3 实验方法 | 第70-74页 |
3.3.1 35S介导MCS的植物过表达载体体系构建 | 第70页 |
3.3.2 MCS融合eGFP的亚细胞定位载体体系构建 | 第70-72页 |
3.3.3 rd29A诱导MCS及eGFP的表达载体系统构建 | 第72页 |
3.3.4 植物过表达载体在拟南芥中的应用 | 第72-73页 |
3.3.5 植物过表达载体抗性筛选条件优化 | 第73页 |
3.3.6 植物表达载体GUS元件功能检测 | 第73-74页 |
3.3.7 植物表达载体eGFP功能检测 | 第74页 |
3.4 结果与分析 | 第74-85页 |
3.4.1 35S介导MCS的植物过表达载体体系构建 | 第74-75页 |
3.4.2 35S驱动MCS-eGFP的亚细胞定位载体体系构建 | 第75-77页 |
3.4.3 rd29A驱动MCS及MCS-eGFP的表达载体构建 | 第77-78页 |
3.4.4 本章构建的植物表达载体序列及比较 | 第78-80页 |
3.4.5 植物表达载体转拟南芥后的抗性筛选 | 第80-81页 |
3.4.6 植物表达载体basta抗性筛选优化及检测 | 第81-83页 |
3.4.7 植物表达载体eGFP功能检测 | 第83-84页 |
3.4.8 植物表达载体GUS功能检测 | 第84-85页 |
3.5 本章讨论 | 第85-87页 |
3.6 本章结论 | 第87-89页 |
第四章 四翅滨藜增殖蛋白AcEBP1非生物胁迫功能解析 | 第89-119页 |
4.1 本章前言 | 第89-90页 |
4.2 实验材料 | 第90-92页 |
4.2.1 实验载体和菌株 | 第90页 |
4.2.2 实验酶类 | 第90-91页 |
4.2.3 实验设备及仪器 | 第91页 |
4.2.4 实验试剂及药品 | 第91页 |
4.2.5 植物材料及培养条件 | 第91-92页 |
4.2.6 本章所用引物 | 第92页 |
4.3 实验方法 | 第92-98页 |
4.3.1 四翅滨藜AcEBP1基因克隆及序列分析 | 第92页 |
4.3.2 四翅滨藜非生物胁迫条件下的AcEBP1表达动态 | 第92-93页 |
4.3.3 AcEBP1在烟草细胞中的亚细胞定位 | 第93-94页 |
4.3.4 AcEBP1过表达T3代转基因拟南芥的获得及鉴定 | 第94-95页 |
4.3.5 AcEBP1过表达对拟南芥部分基因的调控 | 第95页 |
4.3.6 AcEBP1转基因拟南芥非生物胁迫处理 | 第95-96页 |
4.3.7 气孔密度及开度测定 | 第96页 |
4.3.8 叶片水分散失速率测定 | 第96-97页 |
4.3.9 O_2-富集及叶绿素含量测定 | 第97页 |
4.3.10 MDA及POD、SOD酶活测定 | 第97页 |
4.3.11 数据整理及分析 | 第97-98页 |
4.4 结果及分析 | 第98-114页 |
4.4.1 四翅滨藜AcEBP1基因的鉴定与序列分析 | 第98-100页 |
4.4.2 四翅滨藜AcEBP1蛋白定位于细胞核中 | 第100-101页 |
4.4.3 四翅滨藜AcEBP1对非生物胁迫的应答 | 第101-102页 |
4.4.4 AcEBP1转基因拟南芥的获得及基因过表达鉴定 | 第102-105页 |
4.4.5 AcEBP1对拟南芥内源基因的调控 | 第105页 |
4.4.6 AcEBP1过表达增加盐、渗透及ABA胁迫的敏感性 | 第105-109页 |
4.4.7 AcEBP1过表达增加拟南芥对冷胁迫的敏感性 | 第109-110页 |
4.4.8 AcEBP1过表达增强拟南芥的抗旱能力 | 第110-112页 |
4.4.9 AcEBP1通过降低水分消耗提高拟南芥的抗旱性 | 第112-114页 |
4.5 本章讨论 | 第114-116页 |
4.6 本章结论 | 第116-119页 |
第五章 研究结论与展望 | 第119-123页 |
5.1 基本结论 | 第119-120页 |
5.2 研究展望 | 第120-123页 |
参考文献 | 第123-139页 |
附录 | 第139-159页 |
附录一:植物Hoagland营养液(第二、三、四章) | 第139-140页 |
附录二:盐胁迫响应基因qRT-PCR引物(第二章) | 第140-141页 |
附录三:ESTs基因Blast注释(第二章) | 第141-149页 |
附录四:GUS染色液配方(第三章) | 第149-150页 |
附录五:本章构建的12个表达载体图谱(第三章) | 第150-156页 |
附录六:本章所用引物(第四章) | 第156-158页 |
附录七:AcEBP1核酸序列及氨基酸序列(第四章) | 第158-159页 |
作者简介及科研成果 | 第159-163页 |
致谢 | 第163-164页 |