| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第1章 前言 | 第12-20页 |
| ·手性化合物 | 第12页 |
| ·光学活性手性醇 | 第12-13页 |
| ·(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯 | 第13页 |
| ·(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯的合成方法 | 第13-15页 |
| ·化学法 | 第13-14页 |
| ·生物法 | 第14-15页 |
| ·酮还原酶不对称合成(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯 | 第15-18页 |
| ·酮还原酶的催化机理 | 第15-16页 |
| ·辅酶再生 | 第16-17页 |
| ·酮还原酶的资源挖掘 | 第17-18页 |
| ·酮还原酶催化合成(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯的研究现状 | 第18页 |
| ·本课题的研究目的及意义 | 第18-19页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第19-20页 |
| 第2章 酮还原酶的克隆表达 | 第20-30页 |
| ·引言 | 第20页 |
| ·材料与方法 | 第20-25页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·培养基 | 第21页 |
| ·菌种及质粒 | 第21-22页 |
| ·分析方法 | 第22-23页 |
| ·酶活力测定 | 第22页 |
| ·蛋白含量测定 | 第22页 |
| ·气相色谱检测法 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-25页 |
| ·酮还原酶的数据挖掘 | 第23页 |
| ·引物设计 | 第23-24页 |
| ·目的基因PCR扩增 | 第24页 |
| ·表达载体的构建 | 第24-25页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第25页 |
| ·酮还原酶对2-羰基-4-苯基丁酸乙酯的还原 | 第25页 |
| ·结果和讨论 | 第25-29页 |
| ·酮还原酶的数据库挖掘 | 第25-26页 |
| ·酮还原酶的克隆表达 | 第26-28页 |
| ·酮还原酶的功能筛选 | 第28-29页 |
| ·本章小结 | 第29-30页 |
| 第3章 酮还原酶CgKR2的纯化及酶学性质研究 | 第30-40页 |
| ·引言 | 第30页 |
| ·材料与方法 | 第30-33页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·分析方法 | 第30-32页 |
| ·重组大肠杆菌的摇瓶培养与产酶 | 第32页 |
| ·酮还原酶CgKR2的纯化 | 第32页 |
| ·pH对酮还原酶CgKR2的影响 | 第32页 |
| ·温度对酮还原酶CgKR2的影响 | 第32页 |
| ·酮还原酶CgKR2的热稳定性研究 | 第32页 |
| ·金属离子及EDTA对酮还原酶CgKR2的影响 | 第32-33页 |
| ·酮还原酶CgKR2对有机溶剂的耐受性 | 第33页 |
| ·动力学参数测定 | 第33页 |
| ·酮还原酶CgKR2的底物谱研究 | 第33页 |
| ·结果与讨论 | 第33-39页 |
| ·酮还原酶CgKR2的纯化 | 第33-34页 |
| ·pH对酮还原酶CgKR2的影响 | 第34页 |
| ·温度对酮还原酶CgKR2的影响 | 第34-35页 |
| ·酮还原酶CgKR2的热稳定性 | 第35页 |
| ·金属离子及EDTA对酮还原酶CgKR2的影响 | 第35-36页 |
| ·酮还原酶CgKR2对有机溶剂的耐受性 | 第36-37页 |
| ·动力学参数测定 | 第37页 |
| ·酮还原酶CgKR2的底物谱研究 | 第37-39页 |
| ·本章小结 | 第39-40页 |
| 第4章 酮还原酶CgKR2催化合成(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯的研究 | 第40-48页 |
| ·引言 | 第40页 |
| ·材料与方法 | 第40-42页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第40页 |
| ·分析方法 | 第40页 |
| ·细胞的培养与粗酶粉的制备 | 第40-42页 |
| ·摇瓶水平优化 | 第40-41页 |
| ·发酵罐培养 | 第41-42页 |
| ·不对称合成(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯的反应 | 第42页 |
| ·10mL催化反应 | 第42页 |
| ·100mL催化反应 | 第42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-47页 |
| ·摇瓶实验结果 | 第42-43页 |
| ·发酵罐实验结果 | 第43-44页 |
| ·不对称合成(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯的反应结果 | 第44-47页 |
| ·10mL催化反应 | 第44-46页 |
| ·100mL催化反应 | 第46-47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 第5章 酮还原酶CgKR2与葡萄糖脱氢酶的共表达研究 | 第48-54页 |
| ·引言 | 第48页 |
| ·材料与方法 | 第48-50页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第48页 |
| ·分析方法 | 第48页 |
| ·菌株与质粒载体 | 第48页 |
| ·引物设计 | 第48-49页 |
| ·巨大芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶的克隆与表达 | 第49页 |
| ·共表达质粒与重组细胞的构建 | 第49-50页 |
| ·重组细胞的培养及诱导产酶 | 第50页 |
| ·重组细胞催化2-羰基-4-苯基丁酸乙酯反应 | 第50页 |
| ·结果与讨论 | 第50-53页 |
| ·巨大芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶的克隆与表达 | 第50-51页 |
| ·重组细胞的培养与蛋白表达 | 第51-52页 |
| ·重组细胞的发酵罐培养 | 第52页 |
| ·重组细胞催化2-羰基-4-苯基丁酸乙酯反应 | 第52-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 结论和展望 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 附录 | 第63-68页 |
| 攻读硕士期间撰写的论文和专利 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
