| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-32页 |
| ·大肠杆菌重组蛋白表达系统简介 | 第12页 |
| ·大肠杆菌中蛋白可溶表达策略 | 第12-16页 |
| ·选择有利于重组蛋白可溶表达的宿主 | 第13页 |
| ·与分子伴侣或折叠酶共表达 | 第13-14页 |
| ·融合表达 | 第14-15页 |
| ·分泌表达 | 第15页 |
| ·培养条件和诱导方法的选择 | 第15-16页 |
| ·IGF-1的介绍 | 第16-24页 |
| ·IGF-1的发现 | 第16-17页 |
| ·IGF-1的分子结构及特点 | 第17-19页 |
| ·IGF-1的生物学功能 | 第19-22页 |
| ·IGF-1应用与展望 | 第22-24页 |
| ·重组IGF-1的研究进展 | 第24页 |
| ·无细胞蛋白合成系统的简介 | 第24-28页 |
| ·无细胞蛋白合成系统的起源 | 第24-25页 |
| ·无细胞蛋白合成系统的种类 | 第25页 |
| ·无细胞蛋白合成系统蛋白的表达机理 | 第25-26页 |
| ·无细胞蛋白合成系统中影响蛋白合成的关键问题 | 第26-28页 |
| ·无细胞蛋白合成系统的优势 | 第28页 |
| ·分子伴侣简介 | 第28-30页 |
| ·分子伴侣的种类 | 第28-29页 |
| ·GroEL/ES结构 | 第29-30页 |
| ·GroEL/ES结构的复性作用机理 | 第30页 |
| ·富含分子伴侣的无细胞蛋白合成系统的发展方向与应用前景 | 第30-31页 |
| ·本课题拟研究内容 | 第31-32页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第32-39页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·质粒 | 第32页 |
| ·菌株 | 第32页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·主要仪器 | 第33-34页 |
| ·实验及分析方法 | 第34-39页 |
| ·分子克隆相关实验 | 第34-35页 |
| ·菌体浓度测定 | 第35页 |
| ·大肠杆菌细胞超声破碎及胞内蛋白提取 | 第35页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第35页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第35-36页 |
| ·无细胞体系试剂的配制 | 第36-39页 |
| 第三章 hIGF-1表达载体的构建与宿主菌的选择 | 第39-48页 |
| ·引言 | 第39-41页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·菌种及质粒 | 第41页 |
| ·酶和培养基 | 第41页 |
| ·人肝肿瘤组织 | 第41页 |
| ·引物 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-45页 |
| ·提取和合成hIGF-1蛋白相关基因 | 第42-44页 |
| ·用基因工程菌表达hIGF-1融合蛋白 | 第44-45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-47页 |
| ·hIGF-1编码基因的克隆 | 第45-46页 |
| ·克隆载体与表达载体的构建 | 第46页 |
| ·在不同表达载体中表达hIGF-1融合蛋白 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| 第四章 hIGF-1的表达优化 | 第48-54页 |
| ·引言 | 第48页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·菌种 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-49页 |
| ·表达条件的优化 | 第48-49页 |
| ·表达产物可溶性分析 | 第49页 |
| ·实验结果 | 第49-52页 |
| ·不同诱导时间对hIGF-1融合蛋白表达的影响 | 第49-51页 |
| ·不同诱导后培养温度对hIGF-1融合蛋白表达的影响 | 第51-52页 |
| ·不同IPTG浓度对hIGF-1融合蛋白表达的影响 | 第52页 |
| ·不同诱导后培养时间对hIGF-1融合蛋白表达的影响 | 第52页 |
| ·小结 | 第52-54页 |
| 第五章 重组hIGF-1的分离与纯化 | 第54-59页 |
| ·引言 | 第54页 |
| ·实验材料 | 第54-55页 |
| ·蛋白酶 | 第54-55页 |
| ·分离设备 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55页 |
| ·亲和层析分离纯化hIGF-1融合蛋白 | 第55页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第55页 |
| ·肠激酶裂解融合蛋白 | 第55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-59页 |
| ·亲和层析纯化融合蛋白 | 第55-57页 |
| ·凝胶过滤层析交换酶切缓冲液 | 第57页 |
| ·肠激酶裂解融合蛋白 | 第57-59页 |
| 第六章 富含分子伴侣的大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统的初步构建 | 第59-66页 |
| ·引言 | 第59页 |
| ·实验材料 | 第59-60页 |
| ·大肠杆菌菌株 | 第59页 |
| ·试剂 | 第59-60页 |
| ·培养基 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-62页 |
| ·菌株的活化 | 第60页 |
| ·分子伴侣质粒的转化 | 第60页 |
| ·菌体浓度测定 | 第60页 |
| ·重组分子伴侣菌株的表达 | 第60-61页 |
| ·裂解细菌 | 第61页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第61页 |
| ·大肠杆菌抽提物的制备 | 第61页 |
| ·大肠杆菌无细胞蛋白合成系统 | 第61-62页 |
| ·实验结果 | 第62-66页 |
| ·含分子伴侣质粒的重组大肠杆菌生长曲线测定 | 第62-64页 |
| ·含分子伴侣质粒的重组菌的蛋白表达情况 | 第64-65页 |
| ·富含分子伴侣的无细胞蛋白合成系统对eGFP可溶表达的影响 | 第65-66页 |
| 第七章 结论与展望 | 第66-69页 |
| ·结论 | 第66-67页 |
| ·课题展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 作者简历 | 第77页 |
