| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-37页 |
| ·普那霉素的概况 | 第13-19页 |
| ·普那霉素的性质 | 第13-15页 |
| ·普那霉素的作用机制 | 第15-16页 |
| ·普那霉素的耐药机制 | 第16页 |
| ·普那霉素的抗菌活性 | 第16-18页 |
| ·普那霉素的临床应用 | 第18-19页 |
| ·普那霉素生物合成相关基因的概况 | 第19-24页 |
| ·普那霉素Ⅰ(PⅠ)生物合成 | 第19-21页 |
| ·普那霉素Ⅱ(PⅡ)的生物合成 | 第21-22页 |
| ·与普那霉素生物合成相关的调控基因 | 第22页 |
| ·与普那霉素生物合成相关的抗性基因 | 第22页 |
| ·与普那霉素生物合成相关基因的分布情况 | 第22-24页 |
| ·链霉菌抗生素生物合成相关基因的功能分析 | 第24-27页 |
| ·单交换 | 第24-25页 |
| ·交换 | 第25-26页 |
| ·靶基因内删除 | 第26-27页 |
| ·基因阻断的载体选择 | 第27页 |
| ·链霉菌基因转移的方法 | 第27-31页 |
| ·原生质体转化(transformation of protoplasts) | 第28页 |
| ·电穿孔(electroporation) | 第28-29页 |
| ·噬菌体转导(transduction of phage) | 第29页 |
| ·接合转移(conjugation) | 第29-31页 |
| ·利用基因工程提高抗生素产量的研究概况 | 第31-35页 |
| ·链霉菌基因组基本信息及其特点 | 第32页 |
| ·改造基因簇中调控基因 | 第32-33页 |
| ·改造抗性基因 | 第33页 |
| ·利用相关的生物合成基因加速限速反应 | 第33-34页 |
| ·表达整个生物合成基因簇 | 第34页 |
| ·改造次生代谢途径 | 第34-35页 |
| ·本论文的研究目的和思路 | 第35-37页 |
| 第二章 普那霉素生物合成相关基因spy1的功能研究 | 第37-61页 |
| ·引言 | 第37-38页 |
| ·材料与方法 | 第38-53页 |
| ·菌株与质粒 | 第38页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第38页 |
| ·抗生素及相关试剂 | 第38-39页 |
| ·PCR引物 | 第39页 |
| ·主要的仪器设备 | 第39-40页 |
| ·培养基 | 第40-41页 |
| ·溶液的配制 | 第41-43页 |
| ·实验方法 | 第43-53页 |
| ·结果与讨论 | 第53-60页 |
| ·spy1基因中断载体的构建 | 第53-56页 |
| ·重组质粒pKC1139::Δspy1通过接合转移导入始旋链霉菌 | 第56-57页 |
| ·spy1基因中断菌株的筛选 | 第57-58页 |
| ·spy1基因中断菌株的PCR验证 | 第58页 |
| ·spy1基因中断菌株的Southern Blotting验证 | 第58-59页 |
| ·突变菌株发酵产物分析 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 第三章 普那霉素生物合成相关基因spr1、spr4功能研究 | 第61-74页 |
| ·引言 | 第61-62页 |
| ·材料与方法 | 第62-63页 |
| ·菌株与质粒 | 第62页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第62页 |
| ·抗生素及相关的试剂 | 第62页 |
| ·PCR引物 | 第62-63页 |
| ·仪器设备 | 第63页 |
| ·培养基 | 第63页 |
| ·溶液的配制 | 第63页 |
| ·实验方法 | 第63页 |
| ·结果与讨论 | 第63-73页 |
| ·spr1、spr4基因中断载体构建 | 第63-67页 |
| ·重组质粒通过接合转移导入始旋链霉菌 | 第67-68页 |
| ·破坏子的筛选 | 第68-69页 |
| ·破坏子基因组DNA的PCR验证 | 第69-71页 |
| ·破坏子基因组DNA的Southern blotting验证 | 第71页 |
| ·突变菌株发酵产物分析 | 第71-73页 |
| ·小结 | 第73-74页 |
| 第四章 普那霉素生物合成相关基因spr3、spr5基因的功能研究 | 第74-85页 |
| ·引言 | 第74页 |
| ·材料与方法 | 第74-76页 |
| ·菌株与质粒 | 第74页 |
| ·具酶及试剂盒 | 第74-75页 |
| ·抗生素及相关的试剂 | 第75页 |
| ·PCR引物 | 第75页 |
| ·仪器设备 | 第75页 |
| ·培养基 | 第75页 |
| ·溶液的配制 | 第75页 |
| ·实验方法 | 第75-76页 |
| ·结果与讨论 | 第76-84页 |
| ·spr3、spr5基因中断载体的构建 | 第76-79页 |
| ·重组质粒通过接合转移导入始旋链霉菌 | 第79页 |
| ·破坏子的筛选 | 第79-81页 |
| ·破坏子基因组DNA的PCR验证 | 第81-82页 |
| ·破坏子基因组DNA的Southern blotting验证 | 第82-83页 |
| ·破坏子发酵产物分析 | 第83-84页 |
| ·小结 | 第84-85页 |
| 第五章 始旋链霉菌抗性基因ptr的强表达研究 | 第85-93页 |
| ·引言 | 第85-86页 |
| ·材料与方法 | 第86-87页 |
| ·菌株与质粒 | 第86页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第86页 |
| ·抗生素及相关试剂 | 第86-87页 |
| ·PCR引物 | 第87页 |
| ·主要的仪器设备 | 第87页 |
| ·培养基 | 第87页 |
| ·溶液的配制 | 第87页 |
| ·实验方法 | 第87页 |
| ·结果与讨论 | 第87-92页 |
| ·质粒载体pGH112-ermEp~*-ptr的构建及验证 | 第87-90页 |
| ·质粒载体pSET152-ermEp~*-ptr的构建及验证 | 第90页 |
| ·含ptr基因接合子的筛选及验证 | 第90-91页 |
| ·普那霉素高产菌株的筛选 | 第91-92页 |
| ·高产菌株的遗传稳定性研究 | 第92页 |
| ·小结 | 第92-93页 |
| 第六章 总结与展望 | 第93-95页 |
| ·研究结论 | 第93页 |
| ·研究展望 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-104页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第104页 |
