| 中文摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-25页 |
| 1.1 错配修复蛋白MMR研究进展 | 第16-19页 |
| 1.1.1 MMR概述 | 第16页 |
| 1.1.2 原核生物中的MMR | 第16页 |
| 1.1.3 真核生物中的MMR | 第16-18页 |
| 1.1.4 MMR的结构 | 第18-19页 |
| 1.2 错配修复蛋白Mlh3研究进展 | 第19-21页 |
| 1.2.1 错配修复蛋白Mlh3概述 | 第19-20页 |
| 1.2.2 错配修复蛋白Mlh3的结构 | 第20页 |
| 1.2.3 错配修复蛋白Mlh3的定位 | 第20-21页 |
| 1.2.4 错配修复蛋白Mlh3的功能 | 第21页 |
| 1.3 四膜虫概述 | 第21-24页 |
| 1.4 本课题的研究意义 | 第24-25页 |
| 第二章 嗜热四膜虫MLH3基因的鉴定及序列分析 | 第25-38页 |
| 2.1 前言 | 第25页 |
| 2.2 材料 | 第25-26页 |
| 2.2.1 质粒和菌株 | 第25页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.3 试剂配制 | 第26页 |
| 2.2.4 引物 | 第26页 |
| 2.3 方法 | 第26-33页 |
| 2.3.1 嗜热四膜虫的培养、饥饿以及交配 | 第26-27页 |
| 2.3.2 嗜热四膜虫总RNA提取 | 第27-28页 |
| 2.3.3 RACE实验鉴定MLH3 | 第28页 |
| 2.3.4 嗜热四膜虫MLH3基因克隆 | 第28-33页 |
| 2.4 结果 | 第33-37页 |
| 2.4.1 3'RACE扩增结果 | 第33页 |
| 2.4.2 3'RACE测序结果 | 第33-34页 |
| 2.4.3 5'RACE扩增结果 | 第34-35页 |
| 2.4.4 5'RACE测序结果 | 第35-36页 |
| 2.4.5 MLH3的转录本鉴定 | 第36页 |
| 2.4.6 Mlh3序列分析 | 第36-37页 |
| 2.5 讨论 | 第37-38页 |
| 第三章 Mlh3在嗜热四膜虫中的定位分析 | 第38-51页 |
| 3.1 前言 | 第38页 |
| 3.2 材料 | 第38-40页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第38页 |
| 3.2.2 试剂与工具酶 | 第38-39页 |
| 3.2.3 引物 | 第39页 |
| 3.2.4 主要试剂配制 | 第39-40页 |
| 3.3 方法 | 第40-44页 |
| 3.3.1 嗜热四膜虫细胞的培养、饥饿和交配 | 第40页 |
| 3.3.2 嗜热四膜虫中pXS-MLH3过表达载体的构建 | 第40页 |
| 3.3.3 嗜热四膜虫细胞转化 | 第40-41页 |
| 3.3.4 嗜热四膜虫基因组的快速提取 | 第41-42页 |
| 3.3.5 免疫荧光定位检测 | 第42-43页 |
| 3.3.6 红色荧光蛋白载体pXS-mCherry的构建 | 第43页 |
| 3.3.7 mCherry-MLH3的活体检测 | 第43-44页 |
| 3.4 结果 | 第44-49页 |
| 3.4.1 重组质粒pXS-MLH3的构建及鉴定 | 第44-45页 |
| 3.4.2 HA-Mlh3蛋白表达检测 | 第45页 |
| 3.4.3 Mlh3的间接免疫定位分析 | 第45-47页 |
| 3.4.4 pXS-mCherry的构建鉴定 | 第47页 |
| 3.4.5 pXS-mCherry-MLH3的构建鉴定 | 第47-48页 |
| 3.4.6 mCherry-MLH3的活体检测 | 第48-49页 |
| 3.5 讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 Mlh3对四膜虫有性生殖是必需的 | 第51-62页 |
| 4.1 前言 | 第51页 |
| 4.2 材料 | 第51-52页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第51页 |
| 4.2.2 试剂与工具酶 | 第51-52页 |
| 4.2.3 实验所用引物 | 第52页 |
| 4.2.4 主要实验仪器 | 第52页 |
| 4.2.5 主要试剂配制 | 第52页 |
| 4.3 方法 | 第52-53页 |
| 4.3.1 敲除MLH3细胞株的培养 | 第52页 |
| 4.3.2 pNeo-MLH3敲除载体的构建 | 第52-53页 |
| 4.3.3 细胞转化及突变体筛选 | 第53页 |
| 4.3.4 有性生殖发育阶段核形态变化 | 第53页 |
| 4.3.5 有性生殖后代细胞存活检测 | 第53页 |
| 4.4 结果 | 第53-60页 |
| 4.4.1 pNeo-MLH3载体的构建及其重组鉴定 | 第53-55页 |
| 4.4.2 敲除MLH3影响了四膜虫有性生殖的发育形态 | 第55-56页 |
| 4.4.3 敲除MLH3影响四膜虫有性生殖发育进程 | 第56-57页 |
| 4.4.4 敲除MLH3影响新大核基因组修复和复制 | 第57-58页 |
| 4.4.5 MLH3敲除细胞有性生殖后代不能存活 | 第58页 |
| 4.4.6 MLH3敲除细胞有性生殖后期出现凋亡信号 | 第58-60页 |
| 4.5 讨论 | 第60-62页 |
| 总结与展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 附录Ⅰ | 第69-70页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 个人简况及联系方式 | 第72-74页 |
