| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 引言 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-23页 |
| ·甘草酸及其衍生物 | 第15-16页 |
| ·甘草酸的性质及应用 | 第15页 |
| ·单葡萄糖醛酸基甘草次酸的性质及应用 | 第15页 |
| ·甘草次酸的性质及应用 | 第15-16页 |
| ·甘草酸衍生物的制备方法 | 第16-17页 |
| ·化学法 | 第16页 |
| ·生物法 | 第16-17页 |
| ·β--葡萄糖醛酸苷酶的研究现状 | 第17-18页 |
| ·β-葡萄糖醛酸苷酶的来源 | 第17页 |
| ·β-葡萄糖醛酸苷酶的结构 | 第17-18页 |
| ·β-葡萄糖醛酸苷酶的功能 | 第18页 |
| ·酶的热稳定性 | 第18-19页 |
| ·酶热稳定性的概念 | 第18页 |
| ·酶热稳定性的影响因素 | 第18-19页 |
| ·酶热稳定性的表征 | 第19页 |
| ·酶的热稳定性改造 | 第19-20页 |
| ·理性设计策略 | 第19-20页 |
| ·半理性设计策略 | 第20页 |
| ·论文的研究背景及内容 | 第20-22页 |
| ·研究背景研究背景和意义 | 第20-21页 |
| ·论文的研究内容 | 第21-22页 |
| ·技术框架 | 第22-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-38页 |
| ·材料 | 第23-26页 |
| ·菌株、载体与基因 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·药品和试剂 | 第23-25页 |
| ·仪器 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-38页 |
| ·细胞培养 | 第26页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及热击转化 | 第26-27页 |
| ·点突变体的构建 | 第27-29页 |
| ·片段突变体的构建 | 第29-33页 |
| ·重组质粒转化感受态细胞 | 第33页 |
| ·阳性克隆的筛选及验证 | 第33页 |
| ·重组 β-葡萄糖醛酸苷酶的诱导表达 | 第33-34页 |
| ·渗透冲击法制备粗酶液 | 第34页 |
| ·重组 β-葡萄糖醛酸苷酶的纯化 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE | 第34页 |
| ·GL、GAMG、GA的标准曲线绘制 | 第34-37页 |
| ·β-葡萄糖醛酸苷酶的酶活力测定 | 第37页 |
| ·β-葡萄糖醛酸苷酶的热稳定性测定 | 第37页 |
| ·β-葡萄糖醛酸苷酶的Michaelis-Menten动力学分析 | 第37-38页 |
| 第三章 PGUS-E点突变体的构建及酶学性质分析 | 第38-53页 |
| 引言 | 第38页 |
| ·酶结构的分析 | 第38-39页 |
| ·外围点突变体的设计与构建 | 第39-41页 |
| ·外围突变位点的确定 | 第39-40页 |
| ·外围点突变体的构建 | 第40-41页 |
| ·外围点突变体酶学性质的分析 | 第41-43页 |
| ·外围突变体耐热性的的热稳定性测定 | 第41-42页 |
| ·外围突变体的Michaelis-Menten动力学分析 | 第42-43页 |
| ·外围突变体的突变效应分析 | 第43页 |
| ·核心点突变体的设计与构建 | 第43-48页 |
| ·核心突变位点的确定 | 第43-47页 |
| ·核心突变体的构建 | 第47-48页 |
| ·核心点突变体酶学性质的分析 | 第48-52页 |
| ·核心突变体耐热性的热稳定性测定 | 第48-49页 |
| ·核心突变体的突变效应分析 | 第49-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第四章 PGUS-E片段突变体的构建及酶学性质分析 | 第53-63页 |
| 引言 | 第53页 |
| ·GH2嗜热蛋白Loop数据库的建立 | 第53-55页 |
| ·嗜热蛋白晶体结构的筛选 | 第53-54页 |
| ·Loop数据的统计与评级 | 第54-55页 |
| ·片段突变体的设计与构建 | 第55-58页 |
| ·PGUS-E四聚体晶体结构的分析 | 第55-56页 |
| ·突变体的构建 | 第56-58页 |
| ·片段突变体酶学性质的分析 | 第58-62页 |
| ·突变体耐热性的分析 | 第58-59页 |
| ·突变体的圆二色光谱分析 | 第59-60页 |
| ·突变体的Michaelis-Menten动力学分析 | 第60页 |
| ·突变体的突变效应分析 | 第60-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 第五章 PGUS-E底物选择性的研究 | 第63-70页 |
| 引言 | 第63页 |
| ·Binding-Loop的比对分析与突变体构建 | 第63-66页 |
| ·催化特性相似的酶的Binding-Loop比对分析 | 第63-65页 |
| ·Binding-Loop替换突变体的构建 | 第65-66页 |
| ·Binding-Loop对底物选择性的影响 | 第66-69页 |
| ·Binding-Loop突变体的Michaelis-Menten动力学分析 | 第66-67页 |
| ·Binding-Loop的功能分析 | 第67-69页 |
| ·小结 | 第69-70页 |
| 第六章 结论与展望 | 第70-72页 |
| ·结论 | 第70-71页 |
| ·展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简介 | 第78-79页 |
| 附件 | 第79页 |
