| 摘要 | 第1-16页 |
| ABSTRACT | 第16-19页 |
| 缩略词表 | 第19-21页 |
| 第一章 JRL类凝集素的研究进展 | 第21-37页 |
| 一、JRL凝集素的研究历程 | 第22页 |
| 二、JRL凝集素的分类 | 第22-25页 |
| (一) 根据结构域类型 | 第22-23页 |
| (二) 半乳糖结合型和甘露糖结合型 | 第23-25页 |
| 三、JRL凝集素的糖基识别能力 | 第25页 |
| 四、JRL凝集素蛋白的结构 | 第25-31页 |
| (一) JRL蛋白的结构组成 | 第25-28页 |
| (二) JRL蛋白的多聚体结构 | 第28页 |
| (三) JRL蛋白的糖基结合位点 | 第28-29页 |
| (四) JRL蛋白的结构多样性 | 第29-30页 |
| (五) JRL蛋白的进化 | 第30-31页 |
| 五、JRL凝集素表达的组织特异性 | 第31-32页 |
| 六、JRL在植物体内的生物学功能 | 第32-34页 |
| (一) 发挥储藏蛋白的作用 | 第32页 |
| (二) 响应非生物胁迫 | 第32页 |
| (三) 参与植物抗虫反应 | 第32-33页 |
| (四) 参与植物抗病反应 | 第33页 |
| (五) 影响植物生长过程 | 第33页 |
| (六) 参与信号转导及内源调控 | 第33-34页 |
| (七) 与微生物之间相互作用 | 第34页 |
| 七、JRL蛋白参与抗虫抗病反应的方式 | 第34-35页 |
| (一) 发挥毒性蛋白的作用 | 第34页 |
| (二) 限制病毒的繁衍及扩散 | 第34-35页 |
| (三) 依赖于SA/JA介导的防卫信号途径 | 第35页 |
| (四) 通过内源调控参与植物体内的防御反应 | 第35页 |
| 八、JRL蛋白的应用 | 第35-36页 |
| (一) JRL蛋白的医学应用 | 第35-36页 |
| (二) JRL蛋白的农业应用 | 第36页 |
| 九、结语 | 第36-37页 |
| 第二章 小麦JRL类凝集素基因的定位及其在逆境胁迫下的表达 | 第37-49页 |
| 引言 | 第37-38页 |
| 材料和方法 | 第38-40页 |
| 一、植株材料和处理 | 第38页 |
| 二、RNA的提取和cDNA的合成 | 第38-39页 |
| 三、半定量和实时定量RT-PCR | 第39页 |
| 四、染色体定位 | 第39页 |
| 五、小麦JRL基因与小麦α-tubulin的相对表达量计算 | 第39-40页 |
| 结果与分析 | 第40-47页 |
| 一、小麦JRL基因的定位和染色体分布 | 第40-41页 |
| 二、小麦JRL基因的组织表达 | 第41-42页 |
| 三、小麦JRL基因对生物胁迫的响应 | 第42-43页 |
| 四、小麦JRL基因对非生物胁迫的响应 | 第43页 |
| 五、小麦JRL基因对植物激素的响应 | 第43-47页 |
| 讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 TaJRL2基因的鉴定和功能分析 | 第49-73页 |
| 引言 | 第49-50页 |
| 材料与方法 | 第50-56页 |
| 一、实验材料 | 第50页 |
| (一) 植物材料 | 第50页 |
| (二) 菌株与载体 | 第50页 |
| 二、实验方法 | 第50-56页 |
| (一) 胁迫处理 | 第50-51页 |
| (二) 总DNA、RNA的提取和cDNA的合成 | 第51页 |
| (三) 实时定量PCR | 第51页 |
| (四) TaJRL2基因与小麦α-tubulin的相对表达量计算 | 第51页 |
| (五) 基因组步移PCR | 第51页 |
| (六) 序列分析 | 第51页 |
| (七) 连锁分析 | 第51-52页 |
| (八) 洋葱表皮转化 | 第52页 |
| 1、瞬时表达载体的构建 | 第52页 |
| 2、钨弹的制备及轰击转化 | 第52页 |
| (九) 基因枪介导的小麦遗传转化 | 第52-53页 |
| 1、稳定转化表达载体的构建 | 第52-53页 |
| 2、幼胚愈伤组织的获得及基因枪转化材料的培养 | 第53页 |
| (十) GUS染色 | 第53-54页 |
| (十一) 转化植株PCR检测 | 第54页 |
| (十二) 赤霉病抗性鉴定 | 第54页 |
| (十三) His-TaJRL2.1融合蛋白的诱导表达及纯化 | 第54-55页 |
| 1、原核表达载体的构建 | 第54页 |
| 2、His-TaJRL2.1融合蛋白的诱导表达及检测 | 第54-55页 |
| (十四) His-TaJRL2.1蛋白的凝血及糖特异结合实验 | 第55-56页 |
| (十五) His-TaJRL2.1蛋白抗真菌活性检测 | 第56页 |
| 结果与分析 | 第56-71页 |
| 一、TaJRL2的克隆及序列分析 | 第56-59页 |
| 二、TaJRL2的定位 | 第59-62页 |
| (--)TaJRL2.1 | 第59-60页 |
| (二) TaJRL2.2 | 第60-62页 |
| 三、TaJRL2的亚细胞定位 | 第62页 |
| 四、TaJRL2的表达分析 | 第62-65页 |
| (一) TaJRL2的组织表达特异性 | 第62-63页 |
| (二) TaJRL2对胁迫的响应 | 第63-65页 |
| 五、His-TaJRL2.1融合蛋白的凝血活性和糖结合特性 | 第65-67页 |
| 六、TaJRL2.1过表达植株对赤霉菌侵染的抗性 | 第67-70页 |
| 七、His-TaJRL2.1融合蛋白对赤霉菌生长的影响 | 第70-71页 |
| 讨论 | 第71-73页 |
| 第四章 TaJRL2.1互作蛋白的筛选和分析 | 第73-87页 |
| 引言 | 第73页 |
| 材料与方法 | 第73-77页 |
| 一、材料和试剂 | 第73-74页 |
| 二、方法 | 第74-77页 |
| (一) pGBKT7-TaJRL2.1诱饵质粒及pGADT7-TaJRL2.1靶质粒的构建 | 第74页 |
| (二) 载体的自激活验证 | 第74-75页 |
| 1. Y2HGold/Y187酵母感受态细胞制备 | 第74页 |
| 2. pGBKT7-TaJRL2.1载体及pGADT7-TaJRL2.1载体的自激活验证 | 第74-75页 |
| (三) TaJRL2.1自身互作能力检测 | 第75页 |
| (四) TaJRL2.1互作蛋白的筛选 | 第75-76页 |
| 1. cDNA文库的筛选 | 第75页 |
| 2. 酵母质粒的抽提及大肠杆菌转化 | 第75页 |
| 3. 酵母体内一对一回复性验证 | 第75-76页 |
| 4. 序列分析 | 第76页 |
| (五) 赤霉菌处理 | 第76页 |
| (六) 实时定量PCR | 第76-77页 |
| 结果与分析 | 第77-83页 |
| 一、pGBKT7-TaJRL2.1及pGADT7-TaJRL2.1的毒性及自激活检测 | 第77-78页 |
| 二、TaJRL2.1自身互作能力的检测 | 第78-79页 |
| 三、与TaJRL2.1互作的蛋白 | 第79-81页 |
| 四、TaJRL2.1互作基因的表达分析 | 第81-83页 |
| 讨论 | 第83-87页 |
| 第五章 TaJRL2.1转基因植株的比较表达谱分析 | 第87-99页 |
| 引言 | 第87-88页 |
| 材料与方法 | 第88-89页 |
| 一、芯片杂交 | 第88页 |
| 二、Microarray数据分析 | 第88-89页 |
| 三、RNA提取、cDNA合成及实时定量PCR | 第89页 |
| 结果与分析 | 第89-94页 |
| 一、芯片杂交数据质量分析 | 第89页 |
| 二、TaJRL2.1过量表达转基因植株的差异表达基因 | 第89-91页 |
| 三、差异表达基因的功能注释 | 第91-92页 |
| (一) 与抗病及胁迫耐性相关的基因 | 第91页 |
| (二) 与信号传导相关的基因 | 第91页 |
| (三) 与转录调控相关的基因 | 第91-92页 |
| (四) 与代谢及脱毒相关的基因 | 第92页 |
| (五) 与光合作用相关的基因 | 第92页 |
| (六) 其他类别的基因 | 第92页 |
| 四、差异基因的表达分析 | 第92-94页 |
| 讨论 | 第94-99页 |
| 参考文献 | 第99-119页 |
| 附录 | 第119-139页 |
| 全文总结 | 第139-141页 |
| 全文创新点 | 第141-143页 |
| 致谢 | 第143-145页 |
| 发表论文情况 | 第145页 |
