| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-9页 |
| 1 前言 | 第9-15页 |
| ·抗菌肽研究现状 | 第9-12页 |
| ·抗菌肽应用 | 第9-11页 |
| ·抗菌肽的生产 | 第11-12页 |
| ·Metchnikowin、Maginin Ⅱ简介 | 第12页 |
| ·包涵体研究现状 | 第12-14页 |
| ·包涵体形成原因 | 第13页 |
| ·包涵体的优缺点 | 第13-14页 |
| ·包涵体介导抗菌肽的生产 | 第14页 |
| ·本研究目的及意义 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-34页 |
| ·实验材料 | 第15-17页 |
| ·菌种和载体 | 第15-16页 |
| ·主要引物 | 第16-17页 |
| ·实验主要仪器 | 第17-19页 |
| ·试剂耗材 | 第19页 |
| ·试剂配方 | 第19-21页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第19页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第19-20页 |
| ·常规SDS-PAGE | 第19-20页 |
| ·Tricine-SDS-PGEA | 第20页 |
| ·Ni-NTA柱纯化缓冲液 | 第20-21页 |
| ·镍柱重生试剂 | 第21页 |
| ·Western Blot相关试剂 | 第21页 |
| ·包涵体洗涤试剂 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-34页 |
| ·基因类操作方法 | 第21-29页 |
| ·常规PCR | 第21-22页 |
| ·菌落PCR | 第22页 |
| ·重叠PCR | 第22-23页 |
| ·反转录PCR | 第23-24页 |
| ·质粒的抽提 | 第24-25页 |
| ·RNA抽提 | 第25页 |
| ·DNA的酶切和连接 | 第25-27页 |
| ·DNA的体外连接 | 第27页 |
| ·DNA凝胶纯化回收 | 第27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第27-28页 |
| ·感受态的制备 | 第28页 |
| ·热击感受态细胞的转化 | 第28-29页 |
| ·蛋白类操作方法 | 第29-34页 |
| ·考马斯亮蓝法测蛋白浓度标准曲线制作 | 第29页 |
| ·融合蛋白细胞内表达 | 第29页 |
| ·菌体蛋白的获取 | 第29-30页 |
| ·镍柱亲和层析纯化蛋白（Ni-NTA） | 第30页 |
| ·镍柱重生方法 | 第30-31页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第31-32页 |
| ·Western blot免疫印迹 | 第32-33页 |
| ·包涵体洗涤 | 第33页 |
| ·抗菌肽脱盐 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-56页 |
| ·载体的构建 | 第34-40页 |
| ·PCR获取目的基因片段 | 第34-36页 |
| ·pET系列载体构建 | 第36-40页 |
| ·融合蛋白GFP/PagP/TAF-AMPs在大肠杆菌中的表达分析 | 第40-45页 |
| ·融合蛋白GFP/PagP/TAF-AMPs在大肠杆菌中的表达情况 | 第40-43页 |
| ·融合标签GFP/PagP的分析 | 第43-44页 |
| ·蛋白免疫印迹定性分析融合蛋白 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白PagP-NHT-Metch表达条件的优化 | 第45-47页 |
| ·诱导物浓度对重组蛋白表达的影响 | 第45-46页 |
| ·时间对重组蛋白PagP-NHT-Metch诱导表达的影响 | 第46-47页 |
| ·融合标签的分离 | 第47-51页 |
| ·融合蛋白浓度测定方法 | 第47-48页 |
| ·包涵体的溶解 | 第48-49页 |
| ·Ni~(2+)化学性裂解融合蛋白的最佳浓度、时间、温度 | 第49-50页 |
| ·融合标签的沉淀 | 第50-51页 |
| ·抗菌肽Metch、MagⅡ的纯化 | 第51-53页 |
| ·TEV蛋白酶的生产 | 第51-52页 |
| ·重组短肽HT-AMPs的Ni-NTA纯化与TEV酶切 | 第52-53页 |
| ·琼脂糖空穴法检测Metch、Mag Ⅱ的抑菌活性 | 第53-56页 |
| 4 结论与讨论 | 第56-59页 |
| ·结论 | 第56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| ·融合标签分析 | 第56-57页 |
| ·融合表达条件的优化 | 第57页 |
| ·Ni-NTA纯化重组抗菌肽 | 第57-58页 |
| ·展望 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
