| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-25页 |
| ·选题意义 | 第15-16页 |
| ·研究现状 | 第16-23页 |
| ·纤维素简介 | 第16-17页 |
| ·纤维素酶的简介 | 第17-20页 |
| ·纤维素酶转录因子的研究进展 | 第20-22页 |
| ·真菌的转化 | 第22-23页 |
| ·研究目的及内容 | 第23-25页 |
| ·研究目的 | 第23-24页 |
| ·研究内容 | 第24-25页 |
| 第2章 碳代谢阻遏基因cre的克隆及抗性基因的克隆 | 第25-36页 |
| ·实验材料 | 第25-27页 |
| ·菌株及载体 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-30页 |
| ·菌株的培养及菌丝体预处理 | 第27页 |
| ·匍枝根霉基因组DNA提取 | 第27-28页 |
| ·目的片段的扩增 | 第28页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态制备 | 第28页 |
| ·目的基因与pUCm-T载体的连接和转化 | 第28-29页 |
| ·阳性克隆子的筛选、验证和测序 | 第29页 |
| ·单酶切验证 | 第29-30页 |
| ·匍枝根霉孢子对潮霉素B抗菌浓度的确定 | 第30页 |
| ·pRS303H质粒提取 | 第30页 |
| ·潮霉素B抗性基因的克隆 | 第30页 |
| ·结果与讨论 | 第30-35页 |
| ·匍枝根霉DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·目的条带及测序分析 | 第31-32页 |
| ·重组质粒电泳图 | 第32-33页 |
| ·PCR及单酶切验证结果 | 第33页 |
| ·匍枝根霉菌丝体对潮霉素B抗菌浓度的确定 | 第33-35页 |
| ·小结 | 第35-36页 |
| 第3章 构建融合基因转化匍枝根霉菌株 | 第36-50页 |
| ·实验材料 | 第37-38页 |
| ·菌种 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37-38页 |
| ·试剂与仪器 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-43页 |
| ·碳代谢阻遏基因cre和抗性基因的生物信息学分析 | 第38页 |
| ·重叠PCR构建cre-HygB基因 | 第38-39页 |
| ·cre上游片段、下游片段同源臂的纯化与测序 | 第39页 |
| ·抗性基因的获取及纯化 | 第39-40页 |
| ·融合cre同源臂和抗性筛选标记 | 第40页 |
| ·重组质粒的构建 | 第40页 |
| ·孢子电转化 | 第40-41页 |
| ·转化子的验证 | 第41页 |
| ·匍枝根霉转化子PCR验证 | 第41页 |
| ·匍枝根霉转化子的RT-PCR验证 | 第41-43页 |
| ·结果与讨论 | 第43-49页 |
| ·cre基因同源臂片段的获得 | 第43页 |
| ·pRS303H质粒的提取及抗性基因的克隆 | 第43-44页 |
| ·构建cre-HygB基因及电泳图 | 第44页 |
| ·cre-HygB基因连接T载体构建重组质粒 | 第44-46页 |
| ·孢子电转化 | 第46-47页 |
| ·匍枝根霉转化子的PCR验证 | 第47页 |
| ·匍枝根霉转化子的RT-PCR验证 | 第47-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 第4章 匍枝根霉突变株ΔCRE和TP-02发酵产酶实验 | 第50-63页 |
| ·材料与方法 | 第51-55页 |
| ·试剂 | 第51页 |
| ·仪器 | 第51页 |
| ·菌种 | 第51-52页 |
| ·培养基 | 第52页 |
| ·测定方法 | 第52-53页 |
| ·酶活测定 | 第53-55页 |
| ·单一碳源发酵实验 | 第55页 |
| ·淀粉水解液发酵实验 | 第55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-61页 |
| ·葡萄糖标准曲线的绘制 | 第55-56页 |
| ·单一碳源发酵结果分析 | 第56-59页 |
| ·淀粉水解液发酵实验结果分析 | 第59-61页 |
| ·小结 | 第61-63页 |
| 第5章 结论与展望 | 第63-65页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-76页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |