| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 缩略词 | 第12-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-22页 |
| ·参与植物非生物胁迫应答的主要转录因子的研究概述 | 第13-17页 |
| ·AP2/ERF类转录因子 | 第14页 |
| ·MYB类转录因子 | 第14-15页 |
| ·bZIP类转录因子 | 第15页 |
| ·WRKY类转录因子 | 第15-16页 |
| ·HSFs类转录因子 | 第16-17页 |
| ·植物抗寒及相关转录因子CBF的研究概况 | 第17-20页 |
| ·CBF转录因子的结构特征 | 第17页 |
| ·CBF基因家族 | 第17-19页 |
| ·CBF的调控机制 | 第19-20页 |
| ·酵母单杂交 | 第20-21页 |
| ·研究背景与意义 | 第21-22页 |
| 第2章 茶树CBF基因组全长的克隆 | 第22-32页 |
| ·试验材料 | 第22-23页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·质粒与菌株 | 第22页 |
| ·主要试验器材 | 第22-23页 |
| ·试验试剂及配制方法 | 第23页 |
| ·试验方法 | 第23-28页 |
| ·引物设计 | 第23-24页 |
| ·茶树CsCBF3基因3’端与5’端cDNA序列的扩增 | 第24-25页 |
| ·茶树CBF3基因组序列的扩增 | 第25页 |
| ·PCR产物的回收 | 第25页 |
| ·目的片段与pGEM-T载体连接 | 第25-26页 |
| ·DH5a大肠杆菌感受态的制备 | 第26页 |
| ·转化及重组质粒的鉴定测序 | 第26-27页 |
| ·质粒的提取 | 第27页 |
| ·茶树CsCBF3基因的基本生物信息学分析 | 第27-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-31页 |
| ·CsCBF3基因3’端与5’端克隆及CsCBF3全长的克隆 | 第28-29页 |
| ·茶树CsCBF3基因系统进化分析 | 第29-30页 |
| ·保守的氨基酸序列比对分析 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| 第3章 CsCBF3转录功能分析 | 第32-51页 |
| ·试验材料 | 第32-36页 |
| ·菌株与质粒 | 第32页 |
| ·试验器材用具 | 第32-33页 |
| ·试验试剂及配制方法 | 第33-36页 |
| ·试验方法 | 第36-42页 |
| ·引物设计 | 第36-37页 |
| ·目的片段连接pGEM-T载体 | 第37-38页 |
| ·酵母转化载体的构建 | 第38-40页 |
| ·酵母感受态的制备 | 第40-41页 |
| ·CsCBF3转录激活活性分析 | 第41页 |
| ·CsCBF3转录结合活性分析 | 第41-42页 |
| ·试验结果 | 第42-47页 |
| ·载体构建的双酶切鉴定 | 第43页 |
| ·转录激活区的活性鉴定 | 第43-45页 |
| ·转录结合区的活性鉴定 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第47-51页 |
| ·CsCBF1转录激活活性分析时载体与工程菌的选取 | 第47-48页 |
| ·CsCBF3转录结合活性分析时载体与工程菌的选取 | 第48-51页 |
| 第4章 CsCBF1和CsCBF3转基因烟草的获得及鉴定 | 第51-66页 |
| ·试验材料 | 第51-54页 |
| ·植物材料 | 第51页 |
| ·菌株与质粒 | 第51页 |
| ·试验用设备、仪器 | 第51-52页 |
| ·主要试验试剂 | 第52页 |
| ·试剂及培养基的配制 | 第52-54页 |
| ·试验方法 | 第54-60页 |
| ·引物设计 | 第54-55页 |
| ·目的片段CsCBF1与CsCBF3连接T载体 | 第55-56页 |
| ·烟草表达载体的构建 | 第56-58页 |
| ·CsCBF1-pCABIA1300S和CsCBF3-pCABIA1300S熏组质粒转化农杆菌检测 | 第58-59页 |
| ·农杆菌介导的叶盘法转化烟草 | 第59-60页 |
| ·转基因烟草的T_0代检测 | 第60页 |
| ·结果与分析 | 第60-63页 |
| ·烟草表达载体的构建 | 第60-61页 |
| ·CsCBF1、CsCBF3转基因烟草的获得 | 第61-62页 |
| ·T_0代转基因烟草分子检测 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-66页 |
| ·茶树抗冻蛋白基因转化载体与受体植物的选择 | 第63-64页 |
| ·农杆菌侵染外植体时间与方法改进 | 第64页 |
| ·培养基的抑菌方法改进 | 第64页 |
| ·羧苄青霉素浓度与潮霉素筛选压的探讨 | 第64-65页 |
| ·转基因植株的移栽问题 | 第65-66页 |
| 第5章 CBF1和CBF3蛋白的原核表达及纯化 | 第66-74页 |
| ·试验材料 | 第66-67页 |
| ·菌液材料 | 第66页 |
| ·质粒与菌株 | 第66页 |
| ·主要试验器材 | 第66-67页 |
| ·主要试验试剂 | 第67页 |
| ·试验方法 | 第67-70页 |
| ·pCzn1-CBF1和pCzn1-CBF3质粒构建 | 第67-68页 |
| ·重组载体质粒转化至大肠杆菌Arctic Express | 第68页 |
| ·IPTG诱导pCzn 1-CBF1与pCzn 1-CBF3载体融合蛋白的表达 | 第68-69页 |
| ·pCzn 1-CBF1与pCzn 1-CBF3包涵体蛋白的变复性 | 第69页 |
| ·融合蛋白的Ni柱亲和纯化 | 第69-70页 |
| ·试验结果 | 第70-73页 |
| ·pCzn1-CBF1和pCzn1-CBF3载体双酶切鉴定 | 第70页 |
| ·pCZN1-CBF1和pCZN1-CBF3载体融合蛋白的表达分析 | 第70-72页 |
| ·CBF1和CBF3蛋白的Ni柱亲和纯化 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73-74页 |
| 第6章 总结 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 攻读学位期间获得与学位论文相关的科研成果目录 | 第83页 |
