摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-9页 |
缩略词表 | 第9-10页 |
1 绪论 | 第10-18页 |
·二酰甘油酰基转移酶(DGAT)的研究背景 | 第10-14页 |
·DGAT | 第10-11页 |
·DGAT亚型与定位 | 第11-12页 |
·DGAT表达特性 | 第12页 |
·DGAT序列与结构 | 第12-13页 |
·DGAT底物偏好性 | 第13页 |
·DGAT功能与应用 | 第13-14页 |
·产油真菌卷枝毛霉的研究简介 | 第14-15页 |
·卷枝毛霉的生理特性 | 第14-15页 |
·卷枝毛霉脂质代谢 | 第15页 |
·受体菌株缺陷型酿酒酵母H1246 简介 | 第15-16页 |
·立题依据及意义 | 第16页 |
·主要研究内容 | 第16-18页 |
2 材料与方法 | 第18-26页 |
·实验材料 | 第18-20页 |
·菌种和质粒 | 第18页 |
·主要仪器 | 第18-19页 |
·主要试剂 | 第19页 |
·主要试剂的配制 | 第19页 |
·培养基及其配方 | 第19-20页 |
·实验方法 | 第20-26页 |
·卷枝毛霉发酵培养 | 第20页 |
·上清液残留组分分析和生物量测定 | 第20页 |
·卷枝毛霉McDGAT基因表达水平分析 | 第20-21页 |
·卷枝毛霉McDGAT结构与功能的生物信息学分析 | 第21页 |
·卷枝毛霉McDGAT基因表达载体的构建 | 第21-23页 |
·醋酸锂转化法转化卷枝毛霉McDGAT基因 | 第23页 |
·重组酵母菌株McDGAT基因的表达 | 第23-24页 |
·重组酵母菌株McDGAT的诱导表达和生长曲线测定 | 第24页 |
·重组酵母菌株McDGAT催化活性的鉴定 | 第24-25页 |
·重组酵母菌株总脂、TAG含量及TAG脂肪酸组成分析 | 第25-26页 |
3 结果与讨论 | 第26-48页 |
·卷枝毛霉生长和产脂特性分析 | 第26-27页 |
·卷枝毛霉McDGAT基因表达水平分析 | 第27-28页 |
·卷枝毛霉McDGAT结构与功能的生物信息学分析 | 第28-35页 |
·氨基酸序列比对及同源性分析 | 第28-34页 |
·卷枝毛霉McDGAT理化性质预测 | 第34页 |
·卷枝毛霉McDGAT二级结构和跨膜结构分析 | 第34-35页 |
·卷枝毛霉McDGAT基因在酵母中的异源表达 | 第35-39页 |
·二元表达载体的构建 | 第35-36页 |
·重组酵母菌株的PCR验证 | 第36-37页 |
·重组酵母菌株McDGAT基因的表达 | 第37-38页 |
·重组酵母菌株生长特性的描述 | 第38-39页 |
·重组酵母菌株McDGAT催化活性的鉴定 | 第39-43页 |
·尼罗红(Nile Red)染色观察 | 第40-41页 |
·薄层色谱法(TLC)定性分析 | 第41-42页 |
·薄层色谱-气相色谱联用(TLC-GC)定量分析 | 第42-43页 |
·异源表达McDGAT4 基因的重组酵母菌株产脂特点 | 第43-48页 |
·无外源添加脂肪酸时重组酵母菌株产脂特点 | 第43-44页 |
·外源添加LA时重组酵母菌株产脂特点 | 第44-45页 |
·外源添加GLA时重组酵母菌株产脂特点 | 第45-48页 |
主要结论与展望 | 第48-49页 |
致谢 | 第49-50页 |
参考文献 | 第50-55页 |
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第55页 |