| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 本文缩写符号 | 第10-16页 |
| 1. 研究背景及意义 | 第16-26页 |
| ·杆状病毒简介 | 第16-19页 |
| ·杆状病毒的分类 | 第16页 |
| ·杆状病毒的病毒体 | 第16-17页 |
| ·杆状病毒的基因表达 | 第17-18页 |
| ·杆状病毒的生命周期 | 第18-19页 |
| ·杆状病毒核心基因 | 第19-20页 |
| ·杆状病毒结构蛋白 | 第20-22页 |
| ·λ-Red同源重组技术及其在杆状病毒研究中的应用 | 第22-23页 |
| ·Bac-to-Bac系统 | 第23-24页 |
| ·本研究内容和意义 | 第24-26页 |
| 2. 材料和方法 | 第26-51页 |
| ·实验材料 | 第26-33页 |
| ·大肠杆菌菌株及细胞 | 第26页 |
| ·病毒及质粒 | 第26-27页 |
| ·培养基 | 第27页 |
| ·酶和分子量标准 | 第27页 |
| ·抗生素 | 第27页 |
| ·常用溶液 | 第27-29页 |
| ·化学试剂、试剂盒、耗材 | 第29页 |
| ·主要仪器 | 第29-30页 |
| ·引物合成和测序 | 第30-31页 |
| ·本文所构建的重组质粒和病毒 | 第31-33页 |
| ·基因克隆 | 第33-41页 |
| ·pPRO-e25的构建 | 第33-36页 |
| ·pKS-up-cat-dn的构建 | 第36-37页 |
| ·pFB-PH-Pgp16-gfp的构建 | 第37-38页 |
| ·pFB-PH-gfp-e25的构建 | 第38页 |
| ·pFB-PH-gfp-Pie1-e25的构建 | 第38-39页 |
| ·pFB-PH-gfp-Pp10-e25的构建 | 第39页 |
| ·pFB-e25-Pdnapol-gus的构建 | 第39页 |
| ·pFB-e25-Pvp39-gus的构建 | 第39页 |
| ·pFB-Pie1-e25-Pdnapol-gus的构建 | 第39-40页 |
| ·pFB-Pie1-e25-Pvp39-gus的构建 | 第40页 |
| ·pFB-Pdnapol-gus的构建 | 第40页 |
| ·pFB-Pvp39-gus的构建 | 第40页 |
| ·pFB-PH-gfp-e25-Subl的构建 | 第40页 |
| ·pFB-PH-gfp-e25-Sub2的构建 | 第40-41页 |
| ·pFB-PH-gfp-e25-Sub3的构建 | 第41页 |
| ·pFB-PH-gfp-e25-Ins1的构建 | 第41页 |
| ·pFB-PH-gfp-e25-Ins2的构建 | 第41页 |
| ·pFB-PH-gfp-e25-Ins3的构建 | 第41页 |
| ·pFB-PH-gfp-e25-Ins4的构建 | 第41页 |
| ·E25原核表达和蛋白质纯化 | 第41-44页 |
| ·E25原核表达 | 第41-42页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第42-43页 |
| ·可溶蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| ·抗血清制备 | 第44页 |
| ·抗血清的制备 | 第44页 |
| ·非特异性抗体的中和 | 第44页 |
| ·蛋白印迹(Western Blot) | 第44-45页 |
| ·Bacmid突变体的构建 | 第45-47页 |
| ·e25敲除 | 第45-46页 |
| ·e25敲除bacmid的鉴定 | 第46页 |
| ·转座和重组bacmid的鉴定 | 第46-47页 |
| ·DNA对Sf9细胞的转染 | 第47页 |
| ·病毒上清的收取和病毒滴度的测定 | 第47-48页 |
| ·病毒对Sf9细胞的感染 | 第48页 |
| ·B-葡萄糖醛酸酶(GUS)活性检测 | 第48-49页 |
| ·免疫荧光和共聚焦显微镜分析 | 第49-50页 |
| ·肌动蛋白特异性染色 | 第50-51页 |
| 3. 研究结果 | 第51-75页 |
| ·AcMNPV E25序列分析 | 第51-54页 |
| ·e25基因序列及编码蛋白特征分析 | 第51-52页 |
| ·E25蛋白同源性比较 | 第52-54页 |
| ·重组蛋白His-E25的表达及抗血清的制备 | 第54-55页 |
| ·e25敲除和e25敲除异位回复Bacmid突变体的构建 | 第55-57页 |
| ·E25敲除对病毒增殖的影响 | 第57-59页 |
| ·E25表达时相改变对病毒增殖的影响 | 第59-63页 |
| ·e25早表达和过量表达突变体的构建 | 第59-60页 |
| ·e25早表达和过量表达对病毒增殖的影响 | 第60-63页 |
| ·e25敲除和早表达对病毒基因表达的影响 | 第63-66页 |
| ·病毒基因早期表达和晚期表达报告Bacmid构建 | 第63-64页 |
| ·e25敲除和早表达对病毒早期基因表达的影响 | 第64页 |
| ·e25敲除和早表达对病毒晚期基因表达的影响 | 第64-66页 |
| ·E25在转染细胞中的亚细胞定位 | 第66-67页 |
| ·e25序列插入和序列替代突变对病毒增殖和E25亚细胞定位的影响 | 第67-74页 |
| ·e25序列插入和替代bacmid突变体的构建 | 第67页 |
| ·e25序列插入和替代突变对病毒体增殖的影响 | 第67-71页 |
| ·e25序列插入和替代突变对E25亚细胞分布的影响 | 第71-74页 |
| ·e25敲除和早表达对肌动蛋白聚合的影响 | 第74-75页 |
| 4. 讨论 | 第75-78页 |
| 参考文献 | 第78-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
