| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-16页 |
| 缩略语表 | 第16-18页 |
| 1 前言 | 第18-24页 |
| ·喹噁啉类药物概况 | 第18页 |
| ·喹噁啉类药物对肾上腺皮质毒性研究概况 | 第18-22页 |
| ·醛固酮的生物合成和调控过程 | 第19-20页 |
| ·喹噁啉类药物抑制醛固酮合成及分泌的机制研究 | 第20-22页 |
| ·研究目标和内容 | 第22-24页 |
| 2 材料方法 | 第24-46页 |
| ·细胞株 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24-26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·主要试剂的配制 | 第27-29页 |
| ·细胞培养及冻存 | 第29页 |
| ·细胞活力测定 | 第29-30页 |
| ·醛固酮激素分泌水平检测 | 第30页 |
| ·NCI-H295R细胞基因表达谱检测 | 第30-33页 |
| ·样品的RNA抽提 | 第30-31页 |
| ·RNA纯化及质控 | 第31页 |
| ·样品标记 | 第31-32页 |
| ·标记扩增后的cRNA并质检 | 第32-33页 |
| ·芯片杂交 | 第33页 |
| ·芯片洗脱 | 第33页 |
| ·芯片扫描 | 第33页 |
| ·数据分析 | 第33页 |
| ·实时荧光定量PCR验证基因芯片中差异基因的mRNA表达 | 第33-36页 |
| ·细胞总RNA提取 | 第33页 |
| ·cDNA合成 | 第33-34页 |
| ·实时荧光定量Real-time PCR | 第34-36页 |
| ·荧光定量数据分析 | 第36页 |
| ·统计学分析 | 第36页 |
| ·Western Blot方法验证Keap1的蛋白表达情况 | 第36-38页 |
| ·细胞处理及分组 | 第36页 |
| ·细胞蛋白提取及浓度测定 | 第36-37页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第37页 |
| ·转膜 | 第37-38页 |
| ·封闭 | 第38页 |
| ·一抗孵育 | 第38页 |
| ·二抗孵育 | 第38页 |
| ·化学发光显色 | 第38页 |
| ·双向电泳技术检测H295R细胞差异蛋白质组学研究 | 第38-44页 |
| ·细胞处理及分组 | 第39页 |
| ·细胞总蛋白的制备 | 第39页 |
| ·蛋白质定量 | 第39-40页 |
| ·蛋白质水化上样 | 第40页 |
| ·一相等点聚焦(IEF) | 第40-41页 |
| ·IPG胶条平衡 | 第41页 |
| ·二相SDS-PAGE电泳 | 第41-42页 |
| ·固定 | 第42页 |
| ·染色 | 第42页 |
| ·图像扫描及分析 | 第42-44页 |
| ·蛋白质质谱鉴定 | 第44-45页 |
| ·胶内酶解 | 第44页 |
| ·MALDI-TOF质谱分析及数据库搜索 | 第44-45页 |
| ·Western Blot方法验证NME1和TCP1蛋白表达情况 | 第45-46页 |
| 3 结果 | 第46-78页 |
| ·喹烯酮和乙酰甲喹对H295R细胞剂量及时间依赖性毒性作用 | 第46-47页 |
| ·喹烯酮和乙酰甲喹对H295R细胞分泌醛固酮激素的影响 | 第47-48页 |
| ·H295R细胞基因表达谱检测 | 第48-58页 |
| ·总RNA质量的鉴定 | 第48页 |
| ·总RNA完整性的鉴定 | 第48-49页 |
| ·芯片质量与可靠性分析 | 第49页 |
| ·差异基因数量分析 | 第49-50页 |
| ·差异基因的分类 | 第50-58页 |
| ·基因芯片结果中部分差异基因的mRNA表达水平的验证 | 第58-59页 |
| ·RNA质量的鉴定 | 第58页 |
| ·部分差异基因的熔解曲线和标准曲线的图示 | 第58页 |
| ·部分差异基因的mRNA水平检测 | 第58页 |
| ·部分差异基因经qRT-PCR验证及芯片数据的比较结果 | 第58-59页 |
| ·喹烯酮对Keap1和Nrf2蛋白表达的影响 | 第59-60页 |
| ·双向电泳分离喹烯酮作NCI-H295R系细胞的总蛋白 | 第60-78页 |
| ·考马斯亮蓝G-250结合显色法测定蛋白质含量 | 第60页 |
| ·喹烯酮处理与未处理NCI-H295R细胞双向电泳图谱的建立 | 第60-63页 |
| ·差异蛋白质点的质谱鉴定结果 | 第63-74页 |
| ·利用STRING数据库预测蛋白质-蛋白质相互作用结果 | 第74-76页 |
| ·Western blot技术验证双向电泳和质谱鉴定结果 | 第76-78页 |
| 4 讨论 | 第78-88页 |
| ·基因芯片采取的药物作用浓度和作用时间的选择依据 | 第78-79页 |
| ·喹烯酮处理H295R细胞的靶基因功能分析 | 第79-84页 |
| ·物质合成代谢相关基因 | 第79页 |
| ·胆固醇生物合成相关基因 | 第79-81页 |
| ·醛固酮合成通路相关基因 | 第81页 |
| ·调控醛固酮生物合成的相关基因 | 第81-82页 |
| ·氧化应激相关基因 | 第82-84页 |
| ·喹烯酮处理H295R细胞的差异蛋白功能分析 | 第84-85页 |
| ·基因组学和蛋白质组学分析结果之间的关系 | 第85页 |
| ·喹烯酮影响H295R细胞分泌醛固酮激素的分子机制 | 第85-88页 |
| 5 全文总结 | 第88-90页 |
| 6 文献综述：药物对肾上腺盐皮质激素影响研究进展 | 第90-100页 |
| ·醛固酮的作用机制研究 | 第90-91页 |
| ·醛固酮的生物合成和调控 | 第91-93页 |
| ·醛固酮的生物合成过程 | 第91页 |
| ·调控醛固酮合成的主要因素 | 第91-93页 |
| ·醛固酮的分泌和调控因素 | 第93-95页 |
| ·醛固酮的分泌 | 第93页 |
| ·调控醛固酮分泌的主要因素 | 第93-95页 |
| ·药物对肾上腺盐皮质激素的影响研究现状 | 第95-98页 |
| ·与肾素-血管紧张素系统相关 | 第95-96页 |
| ·与Ca/CaM/CaMK通路相关 | 第96-97页 |
| ·类固醇激素合成酶抑制剂 | 第97-98页 |
| ·醛固酮拮抗剂 | 第98页 |
| ·其他 | 第98页 |
| ·展望 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 作者简介 | 第112-113页 |
| 附录 | 第113-132页 |
