| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 縮略语表（Abbreviation) | 第12-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-24页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征 | 第14页 |
| ·PRRSV的病原特性 | 第14-15页 |
| ·PRRSV的分类以及理化特性 | 第14页 |
| ·PRRSV的抗原性 | 第14-15页 |
| ·PRRSV的体外生长特性 | 第15页 |
| ·PRRS的临床症状以及流行病学特点 | 第15-16页 |
| ·PRRSV分子生物学研究进展 | 第16-18页 |
| ·PRRSV基因组的结构和功能 | 第16页 |
| ·PRRSV的主要结构蛋白质 | 第16-18页 |
| ·GP5蛋白 | 第16-17页 |
| ·M蛋白 | 第17页 |
| ·GP3蛋白 | 第17-18页 |
| ·PRRSV的免疫学反应 | 第18-19页 |
| ·PRRSV引起的体液免疫 | 第18页 |
| ·PRRSV引起的细胞免疫 | 第18-19页 |
| ·PRRS疫苗研究进展 | 第19-22页 |
| ·PRRS传统常规疫苗 | 第19-20页 |
| ·弱毒疫苗 | 第20页 |
| ·灭活疫苗 | 第20页 |
| ·PRRS新型疫苗研究进展 | 第20-22页 |
| ·DNA疫苗 | 第21页 |
| ·亚单位疫苗 | 第21页 |
| ·病毒载体疫苗 | 第21页 |
| ·“自杀性”DNA疫苗 | 第21-22页 |
| ·PRRSV疫苗的相关新型佐剂研究进展 | 第22-24页 |
| ·细胞因子类佐剂 | 第22-23页 |
| ·TLR依赖型佐剂 | 第23-24页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第24-25页 |
| 第3章 材料与方法 | 第25-42页 |
| ·试验材料 | 第25-30页 |
| ·毒株、细胞和菌株 | 第25页 |
| ·载体与质粒 | 第25-26页 |
| ·试验动物 | 第26页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第26页 |
| ·抗生素以及培养基的配制 | 第26-27页 |
| ·免疫反应试验所用抗原 | 第27-28页 |
| ·主要缓冲液及其配制 | 第28-30页 |
| ·质粒提取用缓冲液及鉴定试剂 | 第28页 |
| ·感受态细胞制备用试剂 | 第28页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液及试剂 | 第28-29页 |
| ·Western blotting缓冲液及试剂 | 第29页 |
| ·ELISA缓冲液及试剂 | 第29页 |
| ·ELISA所用试剂及其配制 | 第29页 |
| ·其他缓冲液及试剂 | 第29-30页 |
| ·试验方法 | 第30-42页 |
| ·限制性酶切反应 | 第30页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第30页 |
| ·PCR产物或酶切产物回收与纯化 | 第30-31页 |
| ·外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31-32页 |
| ·质粒的制备和鉴定 | 第32-33页 |
| ·质粒的小量制备(碱裂解法) | 第32-33页 |
| ·质粒的中量制备 | 第33页 |
| ·重组质粒(阳性质粒)的鉴定 | 第33页 |
| ·质粒转染(脂质体介导转染法) | 第33-34页 |
| ·常规包涵体提取 | 第34页 |
| ·制备单克隆抗体试验小鼠的免疫 | 第34-35页 |
| ·细胞融合 | 第35页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆 | 第35-36页 |
| ·ELISA检测方法的建立 | 第36页 |
| ·ELISA方阵滴定 | 第36-37页 |
| ·Western Blotting检测目的蛋白在真核细胞中的表达 | 第37-38页 |
| ·样品处理 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第37页 |
| ·Western Blotting检测分析 | 第37-38页 |
| ·单克隆抗体的间接免疫荧光(IFA)验证 | 第38页 |
| ·半数细胞培养物感染量(TCID_(50))的测定 | 第38页 |
| ·微量中和试验(固定病毒-稀释血清法) | 第38-39页 |
| ·动物实验 | 第39页 |
| ·细胞免疫检测 | 第39-41页 |
| ·小鼠脾淋巴细胞的制备 | 第39页 |
| ·免疫小鼠脾细胞总RNA的提取 | 第39-40页 |
| ·cDNA的合成 | 第40页 |
| ·SYBR Green I实时定量PCR | 第40页 |
| ·相对mRNA表达水平的计算 | 第40页 |
| ·IFN-γ的定量检测(双抗体夹心 ELISA) | 第40-41页 |
| ·统计学方法 | 第41-42页 |
| 第4章 结果与分析 | 第42-53页 |
| ·PRRSV GP3蛋白单克隆抗体的制备 | 第42-45页 |
| ·PRRSV-GP3原核及真核表达质粒的构建 | 第42-43页 |
| ·PRRSV GP3蛋白的原核表达及纯化 | 第43-44页 |
| ·免疫小鼠血清抗体效价的确定及抗GP3单克隆抗体的筛选 | 第44页 |
| ·Western Blotting验证抗GP3单克隆抗体 | 第44-45页 |
| ·间接免疫荧光(IFA)验证抗GP3单克隆抗体 | 第45页 |
| ·PRRSV核酸疫苗以及鞭毛蛋白佐剂的研究 | 第45-53页 |
| ·真核表达质粒pVAX-ORF3/5/6的构建 | 第45-47页 |
| ·Western Blotting检测GP5和GP3蛋白在真核细胞中的表达 | 第47页 |
| ·鞭毛蛋白的制备 | 第47-49页 |
| ·原核表达质粒pET-32a-Flic的构建 | 第47-48页 |
| ·鞭毛蛋白的原核表达及纯化 | 第48-49页 |
| ·小鼠试验结果与分析 | 第49-53页 |
| ·免疫小鼠的ELISA抗体水平检测 | 第49-51页 |
| ·免疫小鼠的中和抗体水平检测 | 第51页 |
| ·免疫小鼠脾淋巴细胞IFN-γ的mRNA水平检测 | 第51-52页 |
| ·免疫小鼠脾淋巴细胞分泌的IFN-γ水平检测 | 第52-53页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第53-56页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| ·抗GP3蛋白单克隆抗体的制备 | 第53页 |
| ·共表达GP5、M和GP3蛋白核酸疫苗的构建 | 第53-54页 |
| ·核酸疫苗及鞭毛蛋白佐剂诱导的体液免疫 | 第54页 |
| ·核酸疫苗及鞭毛蛋白佐剂诱导的细胞免疫 | 第54-55页 |
| ·结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
