| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 第—章 实验研究 | 第10-46页 |
| ·乳腺特异表达hFⅨ基因打靶载体的构建 | 第11-20页 |
| ·实验材料 | 第11页 |
| ·实验方法 | 第11-15页 |
| ·从质粒pbCSN2-hFⅨ-pA-RC中扩增人凝血因子ⅨcDNA序列 | 第11-12页 |
| ·扩增bGH PolyA序列 | 第12页 |
| ·奶山羊β—酪蛋白基因5’同源臂的扩增 | 第12-13页 |
| ·奶山羊β—酪蛋白基因3’同源臂的扩增 | 第13-14页 |
| ·PCR扩增产物的连接、鉴定 | 第14-15页 |
| ·实验结果 | 第15-19页 |
| ·人凝血因子Ⅸ的PCR扩增 | 第15页 |
| ·bGH PolyA的PCR扩增 | 第15-16页 |
| ·奶山羊β—酪蛋白基因5’同源臂的PCR扩增 | 第16页 |
| ·奶山羊β—酪蛋白基因3’同源臂的PCR扩增 | 第16-17页 |
| ·hFⅨ插入表达载体PⅢ-PGK-bGH PolyA-Neo | 第17页 |
| ·5’同源臂的酶切鉴定 | 第17-18页 |
| ·3’同源臂的酶切鉴定 | 第18-19页 |
| ·讨论 | 第19-20页 |
| ·奶山羊乳腺上皮细胞及奶山羊耳尖成纤维细胞的制备 | 第20-36页 |
| ·奶山羊乳腺上皮细胞的制备 | 第21-31页 |
| ·实验材料 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-25页 |
| ·奶山羊乳腺上皮细胞的鉴定 | 第22-25页 |
| ·实验结果 | 第25-31页 |
| ·奶山羊乳腺上皮细胞的形态观察 | 第25页 |
| ·奶山羊乳腺上皮细胞复苏后的形态观察 | 第25-26页 |
| ·奶山羊乳腺上皮细胞生长曲线的测定 | 第26-27页 |
| ·免疫荧光细胞染色法鉴定奶山羊乳腺上皮细胞 | 第27-29页 |
| ·RT-PCR检测β-酪蛋白mRNA水平的表达 | 第29-30页 |
| ·奶山羊乳腺上皮细胞对G418的敏感性 | 第30-31页 |
| ·奶山羊耳尖成纤维细胞的制备 | 第31-35页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-35页 |
| ·组织块培养法制备奶山羊耳尖成纤维细胞 | 第31页 |
| ·奶山羊耳尖成纤维细胞形态观察 | 第31-32页 |
| ·奶山羊耳尖成纤维细胞生长曲线的测定 | 第32-33页 |
| ·奶山羊耳尖成纤维细胞对G418的敏感性 | 第33-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| ·人凝血因子Ⅸ乳腺表达载体在体外培养的奶山羊乳腺上皮细胞及奶山羊耳尖成纤维细胞中的表达 | 第36-46页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-40页 |
| ·电穿孔转染法 | 第37-40页 |
| ·转基因细胞的筛选与扩大培养 | 第38-39页 |
| ·PCR鉴定转基因奶山羊耳尖成纤维细胞及乳腺上皮细胞 | 第39-40页 |
| ·实验结果 | 第40-45页 |
| ·制备线性转染质粒 | 第40页 |
| ·电转染奶山羊耳尖成纤维细胞和奶山羊乳腺上皮细胞 | 第40-41页 |
| ·奶山羊耳尖成纤维单克隆细胞 | 第41-42页 |
| ·PCR鉴定转基因奶山羊耳尖成纤维细胞 | 第42-43页 |
| ·PCR鉴定转基因奶山羊乳腺上皮细胞 | 第43-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| 第二章 转基因动物的研究意义、方法及应用前景 | 第46-56页 |
| ·转基因动物的研究意义 | 第46页 |
| ·转基因动物制备的主要实验技术方法及研究进展 | 第46-50页 |
| ·显微注射法 | 第46页 |
| ·精子载体法 | 第46-47页 |
| ·精原干细胞法 | 第47页 |
| ·逆转录病毒载体感染法 | 第47-48页 |
| ·胚胎干细胞法 | 第48页 |
| ·脂质体载体法 | 第48页 |
| ·体细胞核移植 | 第48-49页 |
| ·RNA干扰技术 | 第49页 |
| ·基因打靶技术 | 第49-50页 |
| ·锌指核酸酶技术 | 第50页 |
| ·转基因动物存在问题与发展前景 | 第50-51页 |
| ·乳腺特异性表达转基因研究进展 | 第51-56页 |
| ·概述 | 第51-53页 |
| ·组织特异性表达载体构建特点及表达效率分析 | 第53页 |
| ·乳腺特异性表达载体后期相关鉴定 | 第53-54页 |
| ·奶山羊乳腺生物反应器的研究意义、现状及前景 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
