| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-25页 |
| ·阿魏酸 | 第13-14页 |
| ·阿魏酸酯酶 | 第14页 |
| ·阿魏酸酯酶的来源 | 第14-16页 |
| ·阿魏酸酯酶的分类及特性 | 第16-17页 |
| ·阿魏酸酯酶的结构及催化特性 | 第17-18页 |
| ·微生物来源的阿魏酸酯酶（FAEs）蛋白定向改造 | 第18-21页 |
| ·在制浆造纸行业方面的应用 | 第18-19页 |
| ·在食品行业方面的应用 | 第19页 |
| ·在生物能源方面的应用 | 第19-20页 |
| ·在动物养殖业方面的应用 | 第20页 |
| ·在合成方面的应用 | 第20-21页 |
| ·阿魏酸酯酶的表达宿主类别 | 第21-22页 |
| ·在植物细胞中表达外源的阿魏酸酯酶基因 | 第21页 |
| ·细菌 | 第21页 |
| ·真菌 | 第21-22页 |
| ·产黄青霉 | 第22页 |
| ·本论文的研究意义和内容 | 第22-25页 |
| ·研究意义 | 第22-23页 |
| ·研究内容 | 第23-25页 |
| 第2章 产黄青霉 HA4089 阿魏酸酯酶 A 基因的克隆 | 第25-43页 |
| ·试验材料 | 第25-26页 |
| ·菌株与质粒 | 第25页 |
| ·培养基及相关溶液配制 | 第25-26页 |
| ·工具酶和试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·试验方法 | 第26-32页 |
| ·产黄青霉 HA4089 染色体 DNA 的提取 | 第26-27页 |
| ·产黄青霉 HA4089 阿魏酸酯酶 A 基因的引物设计 | 第27页 |
| ·阿魏酸酯酶 A 的扩增 | 第27-28页 |
| ·产黄青霉 faeA 的 PCR 产物回收 | 第28页 |
| ·阿魏酸酯酶 A 的 PCR 产物亚克隆及大肠杆菌转化 | 第28-29页 |
| ·阿魏酸酯酶 A 外显子 1 和 2 的基因扩增及产物回收 | 第29-30页 |
| ·重叠拼接 PCR 技术克隆 HA4089 阿魏酸酯酶 A cDNA 基因 | 第30页 |
| ·毕赤酵母表达载体 pPIC9K-PcfaeA 的构建 | 第30-32页 |
| ·试验结果与分析 | 第32-41页 |
| ·产黄青霉基因组的提取 | 第32-33页 |
| ·产黄青霉 HA4089 阿魏酸酯酶 A 基因的克隆 | 第33-35页 |
| ·产黄青霉阿魏酸酯酶 A 外显子 1 和外显子 2 基因的扩增 | 第35页 |
| ·阿魏酸酯酶 A 外显子 1 和外显子 2 的重叠拼接 PCR | 第35页 |
| ·表达载体 pPIC9K-PcfaeA 的构建 | 第35-37页 |
| ·阿魏酸酯酶 A cDNA 基因与蛋白序列分析 | 第37-41页 |
| ·本章小结 | 第41-43页 |
| 第3章 产黄青霉 HA4089 阿魏酸酯酶 A 基因在毕赤酵母中的表达 | 第43-55页 |
| ·试验材料 | 第43-44页 |
| ·菌株 | 第43页 |
| ·培养基及相关溶液 | 第43-44页 |
| ·限制性内切酶 | 第44页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·试验方法 | 第44-49页 |
| ·表达载体 pPIC9K-PcfaeA 的线性化 | 第44-45页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·毕赤酵母电转化 | 第45-46页 |
| ·阿魏酸酯酶 A 转化子的筛选 | 第46页 |
| ·毕赤酵母阿魏酸酯酶 A 转化子染色体的提取 | 第46页 |
| ·毕赤酵母阿魏酸酯酶 A 转化子的 PCR 鉴定 | 第46-47页 |
| ·毕赤酵母 faeA 转化子的发酵 | 第47页 |
| ·发酵液蛋白沉淀 | 第47页 |
| ·SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第47-49页 |
| ·阿魏酸酯酶 A 粗酶性质研究 | 第49页 |
| ·试验结果与分析 | 第49-53页 |
| ·表达载体 pPIC9K-PcfaeA 的单酶切 | 第49-50页 |
| ·阿魏酸酯酶 A 毕赤酵母电转化结果 | 第50页 |
| ·毕赤酵母 faeA 活性转化子的筛选 | 第50-51页 |
| ·毕赤酵母重组转化子的分子验证 | 第51页 |
| ·4 株 faeA 转化子的阿魏酸酯酶酶活 | 第51-52页 |
| ·3#转化子发酵液上清的 SDS-PAGE 电泳 | 第52页 |
| ·重组阿魏酸酯酶 A 的酶学性质 | 第52-53页 |
| ·本章小结 | 第53-55页 |
| 第4章 产黄青霉 HA4089 阿魏酸酯酶 C 基因的克隆及表达 | 第55-69页 |
| ·试验材料 | 第55页 |
| ·试验方法 | 第55-58页 |
| ·阿魏酸酯酶 C 的引物设计 | 第55页 |
| ·阿魏酸酯酶 C 基因的扩增 | 第55-56页 |
| ·毕赤酵母表达载体 pPIC9K-PcfaeC 的构建 | 第56-57页 |
| ·表达载体 pPIC9K-PcfaeC 的线性化 | 第57-58页 |
| ·毕赤酵母感受态的制备及电转化 | 第58页 |
| ·阿魏酸酯酶 C 转化子的筛选及染色体的提取 | 第58页 |
| ·毕赤酵母阿魏酸酯酶 C 转化子的 PCR 鉴定 | 第58页 |
| ·毕赤酵母 faeC 转化子的发酵及 SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第58页 |
| ·阿魏酸酯酶 C 粗酶性质研究 | 第58页 |
| ·试验结果及分析 | 第58-67页 |
| ·产黄青霉阿魏酸酯酶 C 基因的克隆 | 第58-59页 |
| ·表达载体 pPIC9K-PcfaeC 的构建 | 第59-60页 |
| ·阿魏酸酯酶 C 测序结果与蛋白序列分析 | 第60-63页 |
| ·表达载体 pPIC9K-PcfaeC 的线性化 | 第63-64页 |
| ·毕赤酵母 faeC 活性转化子的筛选 | 第64页 |
| ·毕赤酵母 faeC 转化子的 PCR 鉴定 | 第64-65页 |
| ·5 株 faeC 转化子的阿魏酸酯酶酶活 | 第65页 |
| ·4#转化子发酵液上清的 SDS-PAGE 电泳 | 第65-66页 |
| ·重组阿魏酸酯酶 C 的酶学性质 | 第66-67页 |
| ·本章小结 | 第67-69页 |
| 全文总结 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 致谢 | 第75-77页 |
| 在学期间主要科研成果 | 第77页 |
