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番茄LeGSH1基因的克隆及在耐镉性中的功能分析

符号说明第1-9页
中文摘要第9-10页
Abstract第10-11页
1 前言第11-24页
   ·植物体内谷胱甘肽合成及生物学功能概述第11-16页
     ·谷胱甘肽的生物合成第11-12页
     ·谷胱甘肽合成的调节第12页
     ·谷胱甘肽在植物中生长发育中的作用第12-13页
     ·谷胱甘肽在植物生物胁迫下的作用第13页
     ·谷胱甘肽在植物非生物胁迫下的作用第13-15页
     ·过表达谷胱甘肽合成相关酶的研究进展第15-16页
   ·镉胁迫的毒害机理概述第16-18页
     ·镉对植物生长的影响第16页
     ·镉在植物体内的吸收及其转运第16-17页
     ·镉胁迫与活性氧代谢第17-18页
     ·植物对镉胁迫的响应机制第18页
   ·谷胱甘肽在重金属胁迫中的作用第18-22页
   ·本试验研究目的及意义第22-24页
2 材料与方法第24-37页
   ·材料处理第24-25页
   ·表达载体的构建第25-29页
     ·总 RNA 的提取第25-26页
     ·cDNA 第一链的合成第26页
     ·PCR 扩增获得目的片段第26-27页
     ·目的片段连接到克隆载体第27页
     ·大肠杆菌的转化第27页
     ·重组质粒的筛选与鉴定第27-28页
     ·重组质粒插入片段方向的酶切鉴定第28页
     ·目的片段连入表达载体 pBI121第28-29页
     ·LeGSH1 基因的生物信息学分析第29页
     ·LeGSH1 基因的时空表达和逆境响应第29页
   ·农杆菌介导的番茄叶片的遗传转化第29-34页
     ·农杆菌感受态细胞的制备第29页
     ·农杆菌的转化第29-30页
     ·农杆菌介导的番茄外源基因转化第30-31页
       ·组培苗的检测第31-34页
   ·镉胁迫下过表达 LeGSH1 转基因植株的指标测定第34-36页
     ·干鲜重的测定第34页
     ·叶片中叶绿素含量的测定第34页
     ·叶片中 LeGSH1 基因表达量的测定第34页
     ·叶片中谷胱甘肽含量的测定第34-35页
     ·叶片中丙二醛含量的测定第35页
     ·叶片中 H_2O_2和 O_2~(.-)含量的测定第35页
     ·叶片中镉、钙、镁、铁和铜含量的测定第35-36页
   ·统计分析第36-37页
3 结果与分析第37-49页
   ·目的基因片段的克隆与表达载体的构建第37-41页
     ·目的基因的克隆第37页
     ·表达载体的构建与检测第37-38页
     ·番茄 LeGSH1 基因的生物信息学分析第38-40页
     ·番茄 LeGSH1 基因的时空表达和逆境响应第40-41页
     ·番茄的遗传转化及检测第41-42页
     ·番茄的遗传转化第41页
     ·转基因植株的 PCR 检测第41-42页
     ·Southern blot 检测转基因植株第42页
   ·镉胁迫对转基因番茄的影响第42-49页
     ·番茄叶片的表观症状第42-43页
     ·对番茄叶片 LeGSH1 表达量的影响第43页
     ·对番茄叶片 GSH 含量的影响第43-44页
     ·对番茄叶片叶绿素含量的影响第44-45页
     ·对番茄植株干鲜重的影响第45页
     ·对叶片中 O_2~(.-)和 H_2O_2含量的影响第45-46页
     ·对叶中丙二醛含量的影响第46-47页
     ·对叶中镉、镁、钙、铁、铜含量的影响第47-49页
4 讨论第49-52页
   ·番茄 LeGSH1 基因的时空表达和逆境响应第49页
   ·LeGSH1 转基因番茄在镉胁迫下的响应第49-52页
5 结论第52-53页
参考文献第53-74页
附录第74-76页
致谢第76-77页
攻读学位期间发表论文情况第77页

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