| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-28页 |
| 1 漆酶研究进展 | 第12-22页 |
| ·漆酶 | 第12页 |
| ·漆酶的理化性质 | 第12-14页 |
| ·漆酶的结构与催化机制 | 第14-17页 |
| ·漆酶的作用底物 | 第17页 |
| ·漆酶的催化反应介体 | 第17-18页 |
| ·漆酶的应用 | 第18-21页 |
| ·漆酶的异源表达 | 第21-22页 |
| 2 毕赤酵母表达系统 | 第22-26页 |
| ·毕赤酵母表达系统的构建及其特点 | 第22-23页 |
| ·用于外源基因表达的常用毕赤酵母类型 | 第23-24页 |
| ·毕赤酵母表达系统的载体 | 第24-25页 |
| ·影响外源蛋白表达的因素 | 第25-26页 |
| 3 研究目的和意义 | 第26页 |
| 4 研究内容和实验方案 | 第26-28页 |
| ·研究内容 | 第26-27页 |
| ·实验方案 | 第27-28页 |
| 第二章 重组漆酶 CCLCC1I 基因的合成与分析 | 第28-40页 |
| 1 材料与方法 | 第28-37页 |
| ·菌株与载体 | 第28-29页 |
| ·试剂 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29页 |
| ·引物的设计与基因的合成 | 第29-34页 |
| ·CCLCC1I 基因密码子优化 | 第34-35页 |
| ·CCLCC1I 基因片段回收 | 第35页 |
| ·CCLCC1I 基因克隆与分析 | 第35-37页 |
| 2 结果与分析 | 第37页 |
| ·CCLCC1I 基因合成 | 第37页 |
| ·基因序列对比 | 第37页 |
| 3 讨论 | 第37-40页 |
| 第三章 CCLCC1I 基因在毕赤酵母中的异源表达 | 第40-52页 |
| 1 材料与方法 | 第40-48页 |
| ·菌株 | 第40页 |
| ·质粒 | 第40页 |
| ·试剂和仪器 | 第40-41页 |
| ·培养基 | 第41页 |
| ·表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·毕赤酵母 GS115 电击转化 | 第42-43页 |
| ·重组酵母转化子筛选 | 第43页 |
| ·重组酵母摇瓶发酵 | 第43-44页 |
| ·漆酶活力测定及动力学研究 | 第44页 |
| ·重组漆酶纯化 | 第44-45页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第45-47页 |
| ·蛋白含量测定 | 第47页 |
| ·重组漆酶含糖量测定 | 第47-48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-50页 |
| ·表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·酵母重组菌的筛选 | 第49页 |
| ·重组菌的发酵 | 第49页 |
| ·重组蛋白的分子大小、含糖量和 Km 值 | 第49-50页 |
| 3 讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 重组漆酶 CCLCC1I 的酶学特性分析 | 第52-59页 |
| 1 材料和方法 | 第52-54页 |
| ·试剂 | 第52页 |
| ·缓冲液配制 | 第52-53页 |
| ·pH 对重组漆酶活性和稳定性的影响 | 第53页 |
| ·温度对重组漆酶活性和稳定性的影响 | 第53-54页 |
| ·无机盐对漆酶活性的影响 | 第54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-58页 |
| ·pH 对重组漆酶的影响 | 第54-55页 |
| ·温度对重组漆酶的影响 | 第55-56页 |
| ·无机盐对重组漆酶的影响 | 第56-58页 |
| 3 讨论 | 第58-59页 |
| 第五章 重组漆酶 CCLCC1I 对染料的降解能力分析 | 第59-64页 |
| 1 材料与方法 | 第59-61页 |
| ·试剂 | 第59页 |
| ·染料结构与性质 | 第59页 |
| ·染料降解实验方法 | 第59-61页 |
| ·HPLC 分析方法 | 第61页 |
| 2 结果与分析 | 第61页 |
| ·染料降解随时间的变化 | 第61页 |
| ·ABTS 浓度对重组漆酶降解染料能力的影响 | 第61页 |
| 3 讨论 | 第61-64页 |
| 本文总结与创新点 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
