| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 引言 | 第12-17页 |
| 1、宏基因组技术概述 | 第12-14页 |
| 2、宏基因组文库的筛选 | 第14-15页 |
| ·功能驱动筛选 | 第14-15页 |
| ·序列驱动筛选 | 第15页 |
| 3、宏基因组学技术研究进展 | 第15-16页 |
| 4、本研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 第一章 酯酶的研究进展 | 第17-19页 |
| 1 酯酶及 BioH 概述 | 第17-18页 |
| ·酯酶概述 | 第17页 |
| ·BioH 概述 | 第17-18页 |
| 2 BioH 及酯酶相关研究进展 | 第18-19页 |
| 第二章 BioHx 克隆表达及酶学性质研究 | 第19-56页 |
| 第一节 宏基因组文库的构建及酯酶基因的筛选 | 第19-32页 |
| 1、材料与方法 | 第19-25页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·样品来源 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·试剂配制 | 第19-20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·宏基因组 DNA 的提取 | 第20-21页 |
| ·CTAB 法提取宏基因组 DNA | 第20-21页 |
| ·异位裂解法提取基因组 DNA | 第21页 |
| ·宏基因组 DNA 文库的构建 | 第21-24页 |
| ·宏基因组 DNA 超声破碎 | 第21页 |
| ·宏基因组 DNA 目的片段割胶回收 | 第21-22页 |
| ·宏基因组 DNA 末端补平 | 第22-23页 |
| ·克隆载体构建 | 第23-24页 |
| ·阳性克隆质粒提取 | 第24页 |
| ·酯酶序列分析 | 第24-25页 |
| 2、结果与分析 | 第25-32页 |
| ·宏基因组 DNA 提取结果 | 第25页 |
| ·宏基因组 DNA 超声破碎电泳图结果 | 第25-26页 |
| ·宏基因组 DNA 目的片段割胶回收结果 | 第26-27页 |
| ·宏基因组 DNA 末端处理结果 | 第27页 |
| ·宏基因组文库筛选 | 第27-28页 |
| ·pEstbioHx 序列分析 | 第28-32页 |
| 第二节 bioHx 基因克隆及表达载体的构建 | 第32-39页 |
| 1、材料与方法 | 第32-36页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·引物设计 | 第32-33页 |
| ·BioH 的 PCR 扩增 | 第33-34页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第34页 |
| ·PCR 产物及载体的双酶切 | 第34-35页 |
| ·双酶切 PCR 产物与载体的连接 | 第35-36页 |
| ·连接产物转化 | 第36页 |
| 2、结果与分析 | 第36-39页 |
| ·bioHx 基因 PCR 扩增结果 | 第36-37页 |
| ·连接结果 | 第37页 |
| ·重组质粒提取结果 | 第37-38页 |
| ·双酶切验证结果 | 第38-39页 |
| 第三节 BioHx 蛋白表达 | 第39-45页 |
| 1、材料与方法 | 第39-42页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39-40页 |
| ·蛋白诱导表达 | 第40页 |
| ·蛋白的裂解 | 第40页 |
| ·柱层析纯化蛋白 | 第40-41页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第41-42页 |
| ·BCA 试剂盒进行蛋白定量 | 第42页 |
| 2、结果与分析 | 第42-45页 |
| ·SDS-PAGE 电泳结果 | 第42-44页 |
| ·BCA 蛋白定量结果 | 第44-45页 |
| ·BCA 标准曲线的建立 | 第44页 |
| ·纯化后的蛋白质浓度 | 第44-45页 |
| 第四节 温度、pH、不同碳原子底物对 BioHx 活性的影响 | 第45-51页 |
| 1 材料与方法 | 第45-47页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·溶液的配制 | 第45页 |
| ·测定方法 | 第45-46页 |
| ·温度影响测定方法 | 第45-46页 |
| ·pH 影响测定方法 | 第46页 |
| ·底物特异性测定方法 | 第46页 |
| ·热稳定性和 pH 稳定性的测定 | 第46-47页 |
| 2、结果与分析 | 第47-51页 |
| ·温度对 BioHx 活性的影响 | 第47-48页 |
| ·pH 对 BioHx 活性的影响 | 第48-49页 |
| ·BioHx 底物特异性测定结果 | 第49页 |
| ·热稳定性和 pH 稳定性测定结果 | 第49-51页 |
| 第五节 金属离子及变性剂、有机溶剂对 BioHx 活性的影响 | 第51-56页 |
| 1、材料与方法 | 第51-53页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·溶液的配制 | 第51-52页 |
| ·金属离子和变性剂对 BioHx 活性影响的测定方法 | 第52页 |
| ·金属离子对 BioHx 活影响的测定方法： | 第52页 |
| ·变性剂对 BioHx 活影响的测定方法： | 第52页 |
| ·有机溶剂对 BioHx 活影响的测定方法 | 第52-53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-54页 |
| ·金属离子和变性剂对 BioHx 活性影响测定结果 | 第53-54页 |
| ·有机溶剂对 BioHx 活性影响测定结果 | 第54页 |
| 3、小结 | 第54-56页 |
| 第三章 ESTx 克隆表达及酶学性质研究 | 第56-72页 |
| 第一节 estx 基因的克隆及表达载体的构建 | 第56-63页 |
| 1、材料与方法 | 第56-59页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·引物设计 | 第56-57页 |
| ·ESTx 的 PCR 扩增 | 第57页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第57页 |
| ·PCR 产物及载体的双酶切 | 第57-58页 |
| ·双酶切 PCR 产物与载体的连接 | 第58页 |
| ·连接产物转化 | 第58-59页 |
| 2、结果与分析 | 第59-63页 |
| ·estx 序列分析结果 | 第59-60页 |
| ·estx 基因 PCR 扩增结果 | 第60-61页 |
| ·PCR 产物与载体连接结果 | 第61-62页 |
| ·重组质粒提取结果 | 第62-63页 |
| ·双酶切验证 | 第63页 |
| 第二节 ESTx 蛋白表达 | 第63-65页 |
| 1、材料与方法 | 第63-64页 |
| 2、结果与分析 | 第64-65页 |
| ·SDS-PAGE 电泳结果 | 第64页 |
| ·BCA 蛋白定量结果 | 第64-65页 |
| 第三节 温度、pH、不同碳原子底物对 ESTx 活性的影响 | 第65-69页 |
| 1、材料与方法 | 第65页 |
| 2、结果与分析 | 第65-69页 |
| ·温度对 ESTx 活性的影响 | 第65-66页 |
| ·pH 对 ESTx 活性的影响 | 第66-67页 |
| ·ESTx 底物特异性测定 | 第67-68页 |
| ·热稳定性和 pH 稳定性测定结果 | 第68-69页 |
| 第四节 金属离子及变性剂、有机溶剂对 ESTx 活性的影响 | 第69-72页 |
| 1、材料与方法 | 第69页 |
| 2、结果与方法 | 第69-71页 |
| ·金属离子和变性剂对 ESTx 活性影响测定结果 | 第69-70页 |
| ·有机溶剂对 ESTx 活性影响测定结果 | 第70-71页 |
| 3、小结 | 第71-72页 |
| 全文小结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
