| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-29页 |
| ·RNAi 研究进展 | 第17-20页 |
| ·RNAi 现象的发现 | 第17页 |
| ·RNAi 作用的基本原理 | 第17-18页 |
| ·RNAi 作用过程相关的酶和蛋白质 | 第18-20页 |
| ·RNAi 的应用研究 | 第20页 |
| ·RNAi 在昆虫研究领域的应用 | 第20-22页 |
| ·利用 RNAi 研究昆虫基因功能 | 第20-21页 |
| ·研究 dsRNA 的传递方式 | 第21-22页 |
| ·转基因植物研究现状 | 第22页 |
| ·转基因植物的发展 | 第22页 |
| ·Bt 转基因植物 | 第22页 |
| ·蜕皮变态发育调控的研究 | 第22-24页 |
| ·昆虫变态发育调控网络 | 第22-24页 |
| ·HR3 基因功能 | 第24页 |
| ·利用昆虫激素防治害虫 | 第24页 |
| ·RNAi 的系统效应 | 第24-27页 |
| ·RNAi 效应的分类 | 第24-25页 |
| ·dsRNA 的吸收方式 | 第25-26页 |
| ·昆虫体内 dsRNA 的干扰作用 | 第26-27页 |
| ·课题研究背景和意义 | 第27页 |
| ·实验设计和技术路线 | 第27-29页 |
| 第二章 dsRNAs-HaHR3 的原核表达 | 第29-48页 |
| ·材料和方法 | 第29-41页 |
| ·靶标基因 | 第29-30页 |
| ·生物信息学分析 | 第30页 |
| ·原核表达系统 | 第30-31页 |
| ·供试昆虫及人工饲料配制 | 第31-32页 |
| ·主要实验试材与试剂 | 第32页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第32-36页 |
| ·HT115 感受态细胞的制备及转化 | 第36-37页 |
| ·dsRNAs 的原核诱导表达 | 第37页 |
| ·HT115 Total RNA 和 dsRNAs 的提取 | 第37-38页 |
| ·dsRNAs 生物活性测定 | 第38-39页 |
| ·qRT-PCR 检测基因沉默效率 | 第39-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-46页 |
| ·HaHR3 生物信息学分析 | 第41-42页 |
| ·原核表达系统的构建 | 第42-43页 |
| ·阳性克隆的菌落 PC R 鉴定 | 第43-44页 |
| ·dsRNAs 表达与分析 | 第44页 |
| ·dsRNAs 沉默效应及其分析 | 第44-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 第三章 干扰靶标 HaHR3 基因的转基因烟草和棉花株系的筛选 | 第48-64页 |
| ·材料和方法 | 第48-57页 |
| ·主要实验试材与试剂 | 第48-51页 |
| ·植物表达干扰载体的构建 | 第51-53页 |
| ·农杆菌的转化 | 第53-54页 |
| ·农杆菌介导法转化三生烟 | 第54-55页 |
| ·农杆菌介导法转化棉花 | 第55页 |
| ·花粉管通道法转化棉花 | 第55-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-62页 |
| ·干扰 HaHR3 的植物表达载体 | 第57-58页 |
| ·农杆菌 LBA4404 的转化 | 第58-59页 |
| ·转基因三生烟的再生 | 第59-60页 |
| ·农杆菌转化再生棉苗的组织培养与分析 | 第60-61页 |
| ·花粉管转化棉花种子的筛选与分析 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-63页 |
| ·小结 | 第63-64页 |
| 第四章 转基因烟草的分子检测 | 第64-74页 |
| ·材料和方法 | 第64-70页 |
| ·主要实验试材与试剂 | 第64页 |
| ·主要仪器设备 | 第64页 |
| ·主要溶液的配制 | 第64-65页 |
| ·转基因烟草 PCR 检测 | 第65-66页 |
| ·转基因烟草 Southern blot 检测 | 第66-70页 |
| ·结果与分析 | 第70-72页 |
| ·转基因烟草 PCR 鉴定 | 第70-71页 |
| ·阳性转基因烟草 Southern blot 验证 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| ·小结 | 第73-74页 |
| 第五章 转基因烟草对棉铃虫 HaHR3 基因的沉默效应 | 第74-94页 |
| ·材料和方法 | 第74-82页 |
| ·主要实验试材与试剂 | 第74页 |
| ·主要仪器设备 | 第74页 |
| ·菌株和质粒 | 第74页 |
| ·主要溶液的配制 | 第74-75页 |
| ·蛋白 HR3 原核表达载体构建 | 第75-77页 |
| ·诱导 HR3 蛋白原核表达 | 第77-78页 |
| ·HaHR3 蛋白原核表达检测 | 第78页 |
| ·HaHR3 抗体制备 | 第78-79页 |
| ·棉铃虫生测 | 第79页 |
| ·qRT-PCR | 第79页 |
| ·蛋白含量测定 | 第79页 |
| ·Western - Blotting 分析 | 第79-80页 |
| ·Ha-sid-1-like（ sil ）基因克隆 | 第80-82页 |
| ·Ha-sil-1 和 Ha - sil - 2 蛋白序列片段的分析 | 第82页 |
| ·统计分析方法 | 第82页 |
| ·结果与分析 | 第82-91页 |
| ·HaHR3 蛋白的原核表达 | 第82-83页 |
| ·转基因烟草对棉铃虫发育的影响 | 第83-86页 |
| ·转基因烟草的 RNAi 沉默效率 | 第86-88页 |
| ·Ha - sil 基因克隆与蛋白序列系统发育树分析 | 第88-91页 |
| ·讨论 | 第91-92页 |
| ·小结 | 第92-94页 |
| 第六章 全文结论 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-102页 |
| 附录 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 作者简历 | 第104页 |
