| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 縮略语表（ABBREVIATION) | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| ·猪肺炎支原体概述 | 第13页 |
| ·猪肺炎支原体致病机理 | 第13-14页 |
| ·猪肺炎支原体粘附因子研究进展 | 第14-17页 |
| ·粘附蛋白P97 | 第14-15页 |
| ·粘附蛋白P102 | 第15页 |
| ·P159蛋白 | 第15-16页 |
| ·P216蛋白 | 第16页 |
| ·Mhp271蛋白 | 第16页 |
| ·P116蛋白 | 第16页 |
| ·Mhp107蛋白 | 第16页 |
| ·Mhp684(P146)蛋白 | 第16-17页 |
| ·猪肺炎支原体其他抗原蛋白的研究进展 | 第17-19页 |
| ·细胞质蛋白P36 | 第17页 |
| ·细胞膜表面抗原蛋白P46 | 第17-18页 |
| ·细胞膜表面脂蛋白P65 | 第18页 |
| ·热休克蛋白DnaK | 第18页 |
| ·NrdF蛋白 | 第18页 |
| ·Mhp366蛋白 | 第18-19页 |
| ·Mhp378蛋白和Mhp651蛋白 | 第19页 |
| ·猪肺炎支原体疫苗研究进展 | 第19-22页 |
| ·常规灭活疫苗 | 第19-20页 |
| ·常规弱毒疫苗 | 第20页 |
| ·基因工程疫苗的研究进展 | 第20-22页 |
| ·猪支原体肺炎的综合防制 | 第22-23页 |
| 第二章 研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 第三章 材料与方法 | 第24-38页 |
| ·实验材料 | 第24-28页 |
| ·菌株 | 第24页 |
| ·质粒和载体 | 第24-25页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第25页 |
| ·培养基和抗生素及其配制 | 第25-26页 |
| ·主要缓冲液和试剂及其配制 | 第26-28页 |
| ·实验动物 | 第28页 |
| ·主要实验仪器及设备 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-38页 |
| ·猪肺炎支原体的培养 | 第28页 |
| ·支原体基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·候选蛋白基因的PCR扩增及密码子SOE-PCR突变 | 第29-30页 |
| ·PCR产物或酶切产物回收与纯化 | 第30-31页 |
| ·外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第31-32页 |
| ·连接产物的转化 | 第32页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定及测序 | 第32-33页 |
| ·重组蛋白的原核表达和SDS-PAGE分析 | 第33页 |
| ·菌落原位免疫印迹初步筛选候选蛋白 | 第33-34页 |
| ·原核表达重组蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| ·间接ELISA分析纯化的候选蛋白的反应原性 | 第35-36页 |
| ·小鼠实验检测候选蛋白的免疫原性 | 第36-38页 |
| 第四章 结果与分析 | 第38-52页 |
| ·候选研究蛋白的选取 | 第38-39页 |
| ·候选蛋白基因扩增 | 第39-40页 |
| ·候选蛋白原核表达载体构建 | 第40-41页 |
| ·重组候选蛋白的原核表达 | 第41-43页 |
| ·全长候选蛋白表达 | 第41-42页 |
| ·去N端跨膜区序列的候选蛋白的原核表达 | 第42-43页 |
| ·菌落原位免疫印迹初步筛选候选蛋白 | 第43-45页 |
| ·MHP感染猪血清中大肠杆菌抗体的中和 | 第43-44页 |
| ·菌落原位免疫印迹初步筛选候选蛋白 | 第44页 |
| ·Western Blot进一步验证初步筛选得到的候选蛋白 | 第44-45页 |
| ·重组候选蛋白的纯化 | 第45-47页 |
| ·候选蛋白与MHP感染阳性猪血清的反应原性分析 | 第47-49页 |
| ·间接ELISA检测候选蛋白与MHP感染猪血清的反应 | 第47页 |
| ·间接ELISA分析候选蛋白与疫苗免疫不同时间的猪血清的反应 | 第47-49页 |
| ·候选蛋白的免疫原性分析 | 第49-52页 |
| ·候选蛋白作抗原检测候选蛋白免疫的小鼠的ELISA抗体水平 | 第49-50页 |
| ·MHP菌体蛋白作抗原检测候选蛋白免疫小鼠的ELISA抗体水平 | 第50-51页 |
| ·MHP全菌蛋白作抗原Western Blot检测候选蛋白免疫鼠血清 | 第51-52页 |
| 第五章 讨论与结论 | 第52-58页 |
| ·讨论 | 第52-56页 |
| ·候选蛋白的选择 | 第52页 |
| ·候选蛋白的原核表达 | 第52-53页 |
| ·菌落原位免疫印迹初步筛选候选蛋白 | 第53-54页 |
| ·候选蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| ·候选蛋白的免疫特性分析 | 第55-56页 |
| ·结论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 附录1 PCR扩增引物 | 第65-68页 |
| 附录2 SOE-PCR定点突变突变引物 | 第68-73页 |
| 附录3 去N端跨膜区引物 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
