| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-14页 |
| 目录 | 第14-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-41页 |
| 第一节 蛋白质O-GLCNAC糖基化修饰的研究进展 | 第18-34页 |
| 引言 | 第18页 |
| 1 O-GlcNAc蛋白糖基化修饰的代谢途径-HSP途径 | 第18-26页 |
| 2 O-GlcNAc蛋白糖基化修饰的检测方法 | 第26-28页 |
| 3 O-GlcNAc修饰对蛋白质功能的调节 | 第28-30页 |
| 4 O-GlcNAc修饰的生物学功能 | 第30-34页 |
| 第二节 转基因克隆动物概述 | 第34-41页 |
| 1 转基因克隆动物研究简介 | 第34页 |
| 2 哺乳动物体细胞核移植机理的研究 | 第34-38页 |
| 3 提高核移植效率的措施 | 第38-39页 |
| 4 转基因克隆的应用和存在的问题 | 第39-41页 |
| 第二章 水牛早期胚胎O-GLCNAC糖基化修饰相关基因与蛋白表达水平检测方法的建立 | 第41-60页 |
| 摘要 | 第41页 |
| 前言 | 第41-42页 |
| 1 材料与方法 | 第42-49页 |
| ·胚胎体外操作与培养相关的试剂及配制 | 第42-43页 |
| ·免疫荧光(IF)相关试剂及配制 | 第43页 |
| ·基因克隆及检测相关试剂与配制 | 第43-44页 |
| ·孤雌激活早期胚胎的获得 | 第44页 |
| ·IF染色方法 | 第44-45页 |
| ·基因克隆 | 第45-47页 |
| ·PCR产物的回收提纯 | 第47页 |
| ·感受态细菌的制备与质粒转化 | 第47页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第47页 |
| ·QRT-PCR方法 | 第47-49页 |
| 2 试验结果 | 第49-55页 |
| ·免疫荧光(IF)染色抗体浓度的优化 | 第49-51页 |
| ·总RNA提取 | 第51-52页 |
| ·鉴定及测序 | 第52-53页 |
| ·水牛GFPT、OGT、OGA序列测定与同源性分析 | 第53-54页 |
| ·QRT-PCR引物鉴定 | 第54-55页 |
| 3 分析与讨论 | 第55-57页 |
| ·IF染色方法的建立 | 第55-56页 |
| ·QRT-PCR方法的建立 | 第56-57页 |
| 4 结论 | 第57-60页 |
| 第三章 水牛早期胚胎O-GLCNAC糖基化修饰相关基因与蛋白表达模式的研究 | 第60-71页 |
| 摘要 | 第60页 |
| 前言 | 第60-61页 |
| 1 材料和方法 | 第61-63页 |
| ·试剂及配制 | 第61页 |
| ·水牛早期胚胎的获得 | 第61-62页 |
| ·IF染色方法 | 第62页 |
| ·QRT-PCR检测方法 | 第62页 |
| ·试验设计 | 第62页 |
| ·统计分析 | 第62-63页 |
| 2 试验结果 | 第63-68页 |
| ·水牛早期胚胎O-GlcNAc糖基化蛋白的表达模式 | 第63-64页 |
| ·水牛早期胚胎GFPT、OGT、OGA基因的表达模式 | 第64-68页 |
| 3 分析与讨论 | 第68-70页 |
| 4 结论 | 第70-71页 |
| 第四章 O-GLCNAC糖基化底物对水牛早期胚胎发育及相关基因表达影响的研究 | 第71-85页 |
| 摘要 | 第71页 |
| 前言 | 第71-72页 |
| 1 材料和方法 | 第72-73页 |
| ·胚胎体外操作与培养相关试剂及配制 | 第72页 |
| ·IF相关试剂及配制 | 第72页 |
| ·基因克隆及检测相关试剂与配制 | 第72页 |
| ·水牛早期胚胎的获得 | 第72-73页 |
| ·免疫荧光染色试验方法 | 第73页 |
| ·QRT-PCR检测方法 | 第73页 |
| ·试验设计 | 第73页 |
| ·统计分析 | 第73页 |
| 2 试验结果 | 第73-81页 |
| ·不同浓度的GlcN对水牛早期胚胎体外发育的影响 | 第73-76页 |
| ·GlcN对水牛早期胚胎发育O-GlcNAc蛋白表达水平的影响 | 第76-77页 |
| ·GlcN对O-GlcNAc糖基化修饰相关基因mRNA表达水平的影响 | 第77-81页 |
| 3 分析与讨论 | 第81-84页 |
| 4 结论 | 第84-85页 |
| 第五章 水牛转基因克隆体系的建立 | 第85-102页 |
| 摘要 | 第85页 |
| 前言 | 第85-86页 |
| 1 材料与方法 | 第86-91页 |
| ·载体构建与纯化相关试剂及配制 | 第86-88页 |
| ·水牛胎儿成纤维细胞的分离培养与转染相关试剂及配制 | 第88页 |
| ·胚胎体外操作与培养相关的试剂及配制 | 第88页 |
| ·载体的纯化与质粒的提取 | 第88页 |
| ·水牛胎儿成纤维细胞的分离培养与转染筛选 | 第88-89页 |
| ·卵母细胞的成熟与转基因克隆重构胚的建立 | 第89-90页 |
| ·转基因克隆胚胎的移植 | 第90页 |
| ·转基因克隆水牛组织免疫荧光分析 | 第90页 |
| ·PCR检测 | 第90页 |
| ·试验设计 | 第90-91页 |
| ·统计分析 | 第91页 |
| 2 试验结果 | 第91-97页 |
| ·不同转染方法将外源基因转染水牛胎儿成纤维细胞对水牛转基因克隆效率的影响 | 第91页 |
| ·水牛胎儿成纤维细胞外源基因电转染次数对水牛转基因克隆效率的影响 | 第91-92页 |
| ·不同EGFP表达载体对水牛转基因克隆效率的影响 | 第92-93页 |
| ·供体细胞对水牛转基因克隆效率的影响 | 第93-94页 |
| ·水牛转基因克隆胚胎的体内发育情况 | 第94页 |
| ·转基因克隆水牛的鉴定 | 第94-97页 |
| 3 讨论与分析 | 第97-100页 |
| ·外源基因的表达观察 | 第97页 |
| ·不同转染方法将外源基因转染水牛胎儿成纤维细胞对水牛转基因克隆效率的影响 | 第97-99页 |
| ·不同的表达载体和电转次数转染供体细胞对水牛转基因克隆效率的影响 | 第99-100页 |
| ·供体细胞对水牛转基因克隆效率的影响 | 第100页 |
| ·转基因克隆水牛的鉴定 | 第100页 |
| 4 结论 | 第100-102页 |
| 第六章 TSA对水牛转基因克隆效率的影响 | 第102-124页 |
| 摘要 | 第102页 |
| 前言 | 第102-103页 |
| 1 材料与方法 | 第103-106页 |
| ·载体构建与纯化相关试剂及配制 | 第103页 |
| ·水牛胎儿成纤维细胞的分离培养与转染相关试剂及配制 | 第103页 |
| ·载体的纯化与质粒的提取 | 第103页 |
| ·水牛胎儿成纤维细胞的分离培养与转染筛选 | 第103-104页 |
| ·细胞表达EGFP的流式细胞仪分析 | 第104页 |
| ·细胞周期的流式细胞仪分析 | 第104页 |
| ·卵母细胞的成熟与转基因核移植重构胚的构建 | 第104页 |
| ·转基因克隆胚胎的收集、反转录及QRT-PCR分析 | 第104-105页 |
| ·转基因克隆胚胎的收集及IF分析 | 第105页 |
| ·试验设计 | 第105页 |
| ·统计分析 | 第105-106页 |
| 2 试验结果 | 第106-120页 |
| ·供体细胞不同培养代数对转EGFP细胞数目的影响 | 第106页 |
| ·TSA对转EGFP基因水牛胎儿成纤维细胞细胞周期的影响 | 第106-109页 |
| ·TSA对表达EGFP细胞的影响 | 第109-110页 |
| ·TSA处理转EGFP水牛胎儿成纤维细胞对其乙酰化水平的影响 | 第110-111页 |
| ·TSA处理转EGFP水牛胎儿成纤维细胞对其DNA甲基化水平的影响 | 第111-113页 |
| ·TSA处理供体细胞对水牛转基因克隆效率的影响 | 第113-114页 |
| ·TSA处理转基因克隆重构胚对水牛转基因克隆效率的影响 | 第114-115页 |
| ·TSA处理重构胚不同时间对水牛转基因克隆效率的影响 | 第115页 |
| ·TSA对转基因克隆胚胎乙酰化水平的影响 | 第115-118页 |
| ·TSA对转基因克隆重构胚HAT1和HDAC1基因表达的影响 | 第118-120页 |
| 3 讨论与分析 | 第120-122页 |
| ·TSA对转EGFP水牛胎儿成纤维细胞的影响 | 第120-121页 |
| ·TSA处理转EGFP水牛胎儿成纤维细胞及克隆重构胚对转基因克隆胚胎早期发育、乙酰化水平及相关基因表达水平的影响 | 第121-122页 |
| 4 结论 | 第122-124页 |
| 参考文献 | 第124-135页 |
| 图片与说明 | 第135-140页 |
| 附录 | 第140-141页 |
| 致谢 | 第141页 |
