| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-26页 |
| 1 猪流行性腹泻概述 | 第13-18页 |
| ·PED流行情况 | 第13-14页 |
| ·临床特征 | 第14页 |
| ·发病机理 | 第14-15页 |
| ·病理变化 | 第15页 |
| ·诊断 | 第15-17页 |
| ·免疫学诊断技术研究 | 第15-16页 |
| ·分子生物学诊断技术研究 | 第16-17页 |
| ·防治 | 第17-18页 |
| 2 猪流行性腹泻病毒概述 | 第18-21页 |
| ·形态结构 | 第18页 |
| ·理化特性及抗原性 | 第18页 |
| ·培养特性 | 第18-19页 |
| ·病毒基因组特征 | 第19-21页 |
| 3 猪流行性腹泻病毒DNA疫苗的研究现状 | 第21-22页 |
| 4 运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌载体系统研究进展 | 第22-25页 |
| ·减毒沙门氏菌的侵染机制 | 第22-23页 |
| ·减毒沙门氏菌对质粒DNA的呈递作用 | 第23页 |
| ·减毒沙门氏菌作为DNA质粒载体的应用 | 第23-25页 |
| 5 试验目的意义 | 第25-26页 |
| 第二章 PEDV M、N基因的分子克隆与序列分析 | 第26-37页 |
| 1 材料与方法 | 第27-32页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·毒株、细胞、菌株及试剂 | 第27页 |
| ·仪器设备 | 第27页 |
| ·主要溶液配置 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-32页 |
| ·PEDV的细胞培养 | 第28页 |
| ·PEDV病毒RNA提取 | 第28页 |
| ·M、N基因cDNA引物合成 | 第28-29页 |
| ·M、N基因克隆 | 第29-32页 |
| ·M、N基因的RT-PCR扩增 | 第29页 |
| ·目的基因的回收 | 第29-30页 |
| ·目的片段连接克隆载体 | 第30页 |
| ·阳性克隆的转化与筛选 | 第30-31页 |
| ·重组质粒转化感受态细胞 | 第31页 |
| ·重组菌的鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组质粒序列测定 | 第32页 |
| ·M、N基因及编码蛋白的分子特性分析 | 第32页 |
| 2、结果 | 第32-35页 |
| ·M、N基因RT-PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·M、N基因重组质粒酶切鉴定 | 第33页 |
| ·M、N基因序列及分子特性 | 第33-35页 |
| ·开放阅读框(ORF)特征 | 第33-34页 |
| ·M、N基因同源性分析 | 第34页 |
| ·信号肽分析 | 第34页 |
| ·M、N蛋白氨基酸的疏水性分析 | 第34-35页 |
| 3、讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 PEDV M、N基因共表达真核质粒的构建 | 第37-46页 |
| 1 材料与方法 | 第37-41页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·细胞、质粒、菌株 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37-38页 |
| ·方法 | 第38-41页 |
| ·真核质粒pIRES-M-N的构建 | 第38-39页 |
| ·真核质粒pIRES-M、pIRES-N的构建 | 第38页 |
| ·重组真核质粒pIRES-M-N的构建 | 第38-39页 |
| ·重组真核表达载体的真核转染及表达 | 第39-40页 |
| ·重组真核质粒表达产物的鉴定 | 第40-41页 |
| ·表达产物的间接免疫荧光检测 | 第40-41页 |
| ·表达产物的Western-blotting检测 | 第41页 |
| 2 结果 | 第41-44页 |
| ·重组真核表达载体pIRES-N、pIRES-M、pIRES-M-N的酶切鉴定 | 第41-43页 |
| ·重组质粒真核表达产物的间接免疫荧光检测 | 第43页 |
| ·重组质粒pIRES-N、pIRES-M、pIRES-M-N真核表达产物的SDS-PAGE 和 Westenr-blotting 检测 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 携带PEDV M、N基因的减毒沙门氏菌构建及免疫效力的初步研究 | 第46-59页 |
| 1 材料与方法 | 第47-50页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-50页 |
| ·重组质粒电转化入减毒沙门氏菌S.C500 | 第47-48页 |
| ·电转化主要操作步骤 | 第47页 |
| ·重组菌的pIRES-M-N质粒PCR鉴定 | 第47-48页 |
| ·重组菌的体外质粒稳定性试验 | 第48页 |
| ·以小鼠为模型的重组菌免疫原性初步研究 | 第48-50页 |
| ·试验动物分组及其免疫 | 第48-49页 |
| ·重组菌对小鼠的安全性试验 | 第49页 |
| ·重组菌在小鼠体内的消长实验 | 第49页 |
| ·抗PEDV抗体的监测 | 第49-50页 |
| ·抗PEDV IgA抗体检测 | 第50页 |
| ·免疫小鼠白介素4 (IL-4)和干扰素Y (IFN- Y )检测 | 第50页 |
| 2 结果 | 第50-57页 |
| ·重组菌构建的试验 | 第50-52页 |
| ·转化入减毒沙门氏菌S.C500的pIRES-M-N质粒PCR鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组菌的体外稳定性试验 | 第51-52页 |
| ·重组菌的小鼠动物试验 | 第52-57页 |
| ·重组菌的小鼠安全性试验 | 第52页 |
| ·重组菌在小鼠体内的消长情况监测 | 第52-53页 |
| ·小鼠的PEDV抗体检测 | 第53-54页 |
| ·抗PEDV IgA抗体检测 | 第54-55页 |
| ·免疫组小鼠细胞因子的定量检测 | 第55-57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
