| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-28页 |
| ·胰腺癌发病的分子机制 | 第13-18页 |
| ·原癌基因突变 | 第13-16页 |
| ·抑癌基因缺失与突变 | 第16-17页 |
| ·端粒缩短 | 第17页 |
| ·血管发生 | 第17-18页 |
| ·胰腺癌的治疗靶点 | 第18-21页 |
| ·RAS-MAPK信号通路 | 第18-20页 |
| ·表皮生长因子受体 | 第20页 |
| ·靶向血管生成 | 第20-21页 |
| ·胰腺癌治疗的其它分子靶点 | 第21页 |
| ·核糖体蛋白与肿瘤 | 第21-23页 |
| ·肿瘤中核糖体蛋白的异常 | 第21-22页 |
| ·核糖体蛋白在肿瘤中的作用机制 | 第22-23页 |
| ·RNA干扰技术在肿瘤中的应用 | 第23-27页 |
| ·RNA干扰的方式 | 第24-25页 |
| ·RNA干扰应用于肿瘤的基因治疗 | 第25-26页 |
| ·利用RNA干扰技术寻找肿瘤治疗靶点 | 第26-27页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 慢病毒介导的RNA干扰构建KRAS低表达的稳转细胞系 | 第28-45页 |
| ·引言 | 第28页 |
| ·实验材料 | 第28-30页 |
| ·实验方法 | 第30-37页 |
| ·细胞培养 | 第30页 |
| ·构建pLKO.1-GFP慢病毒转移质粒 | 第30-33页 |
| ·包装慢病毒侵染人胰腺癌PANC-1细胞 | 第33-34页 |
| ·流式细胞术分选GFP阳性细胞 | 第34页 |
| ·GFP阳性细胞的稳定性验证 | 第34-35页 |
| ·检测稳转细胞系KRAS基因的表达 | 第35-37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-44页 |
| ·构建pLKO.1-GFP慢病毒转移质粒 | 第37-38页 |
| ·包装慢病毒侵染人胰腺癌PANC-1细胞 | 第38-40页 |
| ·GFP阳性细胞的验证 | 第40-42页 |
| ·P-M、P-W、P-H三株细胞中KRAS基因的表达 | 第42-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 第三章 基因芯片分析KRAS低表达稳转细胞系的基因表达谱特征 | 第45-57页 |
| ·引言 | 第45页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-47页 |
| ·细胞培养 | 第46页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第46页 |
| ·人全基因组表达谱芯片分析 | 第46页 |
| ·芯片的数据分析 | 第46页 |
| ·实时定量PCR对芯片结果进行验证 | 第46-47页 |
| ·结果与讨论 | 第47-56页 |
| ·提取细胞的总RNA | 第47-48页 |
| ·芯片杂交过程中的质量控制 | 第48-49页 |
| ·基因芯片检测P-M和P-W细胞基因表达谱的变化 | 第49-52页 |
| ·P-M和P-W细胞中变化基因的通路分析 | 第52-53页 |
| ·芯片结果的验证 | 第53-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 第四章 siRNA沉默胰腺癌细胞中的RPL21、RPL31、RPL39、RPL26、RPL29基因 | 第57-88页 |
| ·引言 | 第57页 |
| ·实验材料 | 第57-58页 |
| ·实验方法 | 第58-64页 |
| ·细胞培养 | 第58-59页 |
| ·siRNA的设计合成及转染 | 第59-61页 |
| ·细胞增殖及克隆形成分析 | 第61页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期 | 第61-62页 |
| ·细胞凋亡分析 | 第62页 |
| ·流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平 | 第62页 |
| ·Transwell小室检测细胞迁移 | 第62-63页 |
| ·ELISA检测细胞上清中血管内皮生长因子(VEGF)表达 | 第63页 |
| ·在P-M和P-W细胞中过表达KRAS基因 | 第63-64页 |
| ·结果与讨论 | 第64-86页 |
| ·KRAS基因在P-M和P-W细胞中的过表达 | 第64-67页 |
| ·siRNA转染PANC-1细胞的干扰效果 | 第67-72页 |
| ·沉默RPL21、RPL31、RPL39、RPL26、RPL29的表达对细胞增殖的影响 | 第72-75页 |
| ·沉默RPL21、RPL31、RPL39、RPL26、RPL29的表达对细胞周期的影响 | 第75-77页 |
| ·沉默RPL21、RPL39、RPL26、RPL29的表达对PANC-1细胞凋亡的影响 | 第77-80页 |
| ·沉默RPL26、RPL29的表达对PANC-1细胞内ROS水平的影响 | 第80-82页 |
| ·沉默RPL31的表达对PANC-1细胞迁移的影响 | 第82-83页 |
| ·沉默RPL31的表达对PANC-1细胞VEGF表达的影响 | 第83-84页 |
| ·沉默RPL26、RPL29的表达对P-M和P-W细胞周期及凋亡的影响 | 第84-86页 |
| ·小结 | 第86-88页 |
| 第五章 siRNA沉默人胰腺癌裸鼠移植瘤中的RPL21、RPL31、RPL39基因 | 第88-102页 |
| ·引言 | 第88页 |
| ·实验材料 | 第88-89页 |
| ·实验方法 | 第89-91页 |
| ·细胞培养 | 第89页 |
| ·siRNA的设计及合成 | 第89页 |
| ·建立人胰腺癌BxPC-3细胞的裸鼠移植瘤模型 | 第89页 |
| ·裸鼠移植瘤内注射siRNA及瘤体积的测量 | 第89页 |
| ·各处理组的移植瘤组织中RPL31、RPL21、RPL29的表达 | 第89-90页 |
| ·免疫组织化学法检测移植瘤组织中Ki-67及CD31的表达 | 第90-91页 |
| ·原位末端标记技术(TUNEL)检测肿瘤组织原位细胞凋亡 | 第91页 |
| ·结果与讨论 | 第91-101页 |
| ·siRNA对裸鼠体移植瘤的抑瘤效果 | 第91-94页 |
| ·裸鼠皮下移植瘤组织中RPL31、RPL21、RPL39基因的表达 | 第94-96页 |
| ·裸鼠皮下移植瘤组织中Ki-67蛋白的表达 | 第96-98页 |
| ·裸鼠皮下移植瘤组织中CD31蛋白的表达 | 第98-99页 |
| ·各处理组的裸鼠移植瘤中细胞凋亡的情况 | 第99-101页 |
| ·小结 | 第101-102页 |
| 第六章 结论与展望 | 第102-105页 |
| ·主要结论 | 第102-103页 |
| ·主要创新点 | 第103页 |
| ·展望 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-114页 |
| 攻读博士期间撰写的论文与专利 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 附录1 | 第116-124页 |
| 附录2 | 第124-125页 |
| 附录3 | 第125页 |
