| 论文独创性声明 | 第1页 |
| 关于论文使用授权的声明 | 第3-7页 |
| 中文摘要 | 第7-8页 |
| 英文摘要 | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-21页 |
| 一 材料与方法 | 第21-33页 |
| 1 实验材料和主要仪器 | 第21-23页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·质粒和菌株 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21-23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| 2 实验方法 | 第23-33页 |
| ·重组表达质粒pBVMN的构建与鉴定 | 第23-28页 |
| ·MN基因片断的制备 | 第24-26页 |
| ·重组质粒菌pMD18-T-MN的培养 | 第24页 |
| ·重组质粒pMD18-T-MN的提取 | 第24-25页 |
| ·重组质粒pMD18-T-MN的鉴定 | 第25页 |
| ·MN基因片段的获取 | 第25-26页 |
| ·表达质粒pBV220的制备 | 第26页 |
| ·表达质粒pBV220的鉴定 | 第26页 |
| ·表达载体pBV220的制备 | 第26页 |
| ·感受态大肠杆菌DH5α的制备 | 第26-27页 |
| ·表达载体pBV MN的构建 | 第27页 |
| ·重组质粒菌的筛选 | 第27页 |
| ·重组质粒pBV MN的鉴定 | 第27-28页 |
| ·单酶切鉴定 | 第27页 |
| ·双酶切鉴定 | 第27-28页 |
| ·MN基因序列测定 | 第28页 |
| ·MN基因在大肠杆菌中的表达和鉴定 | 第28-29页 |
| ·兔抗PRRSV的制备 | 第28页 |
| ·MN基因在大肠杆菌中的诱导表达及最佳诱导条件的选择 | 第28页 |
| ·表达产物的SDS—PAGE电泳和Western—blotting分析 | 第28-29页 |
| ·PRRSV-SCQ M蛋白用于诊断抗原的研究 | 第29-33页 |
| ·M蛋白的获得 | 第29页 |
| ·M蛋白含量的测定 | 第29页 |
| ·酶标SPA的制备 | 第29-30页 |
| ·待测血清中抗E.coli成分的除去 | 第30页 |
| ·正常E.coli裂解物上清的制备 | 第30页 |
| ·以正常E.coli成分吸附待测血清中的抗E.coli抗体 | 第30页 |
| ·M—ELISA最佳反应条件的选择 | 第30页 |
| ·酶标SPA工作浓度的选择 | 第30页 |
| ·M抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的选择 | 第30页 |
| ·M-ELISA方法 | 第30-31页 |
| ·M—ELISA特异性试验 | 第31页 |
| ·M—ELISA重复性试验 | 第31页 |
| ·与IDEXX公司试剂盒比较试验 | 第31-32页 |
| ·本地血清检测 | 第32-33页 |
| 二 结果与分析 | 第33-43页 |
| 1 重组表达质粒pBVMN的构建与鉴定 | 第33-36页 |
| ·重组质粒pMD18-T-MN的鉴定 | 第33页 |
| ·表达质粒pBV220的鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组质粒pBV MN的鉴定 | 第34-36页 |
| ·重组质粒pBV MN的酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·MN基因序列测定 | 第35-36页 |
| 2 MN基因在大肠杆菌中的表达和定 | 第36-38页 |
| ·兔抗PRRSV效价测定 | 第36页 |
| ·MN基因在大肠杆菌中的诱导表达及最佳诱导条件的选择 | 第36-37页 |
| ·表达产物的SDS—PAGE电泳和Western—blotting分析 | 第37-38页 |
| 3 PRRSV-SCQ M蛋白用于诊断抗原的研究 | 第38-43页 |
| ·M蛋白含量的测定 | 第38页 |
| ·酶标SPA工作浓度的选择 | 第38页 |
| ·M抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的选择 | 第38-39页 |
| ·判定标准的确定 | 第39-40页 |
| ·ELISA特异性试验 | 第40页 |
| ·竞争性抑制试验 | 第40页 |
| ·交叉试验 | 第40页 |
| ·M—ELISA重复性试验 | 第40-41页 |
| ·批内重复试验 | 第40-41页 |
| ·批间重复试验 | 第41页 |
| ·与IDEXX公司试剂盒比较试验 | 第41-42页 |
| ·本地血清检测 | 第42-43页 |
| 三 讨论 | 第43-49页 |
| 1 表达载体pBV220 | 第43页 |
| 2 重组表达质粒的构建和鉴定 | 第43-44页 |
| 3 MN基因的诱导表达 | 第44-46页 |
| 4 蛋白的纯化 | 第46页 |
| 5 M-ELISA方法和样品检测 | 第46-49页 |
| 四 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 发表文章目录 | 第57页 |
