| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-28页 |
| ·棉纤维发育的进程 | 第13-16页 |
| ·起始期 | 第13-14页 |
| ·伸长期 | 第14-15页 |
| ·次生壁加厚期 | 第15页 |
| ·成熟期 | 第15-16页 |
| ·棉纤维次生壁加厚期的研究进展 | 第16-20页 |
| ·次生壁加厚期的主要酶系 | 第16-19页 |
| ·棉纤维次生壁加厚期相关基因的克隆及表达分析 | 第19-20页 |
| ·差异表达基因的研究策略 | 第20-23页 |
| ·mRNA差异显示技术 | 第21页 |
| ·基因表达序列分析技术 | 第21-22页 |
| ·基因芯片技术 | 第22页 |
| ·Solexa测序技术 | 第22-23页 |
| ·抑制性消减杂交技术 | 第23-27页 |
| ·抑制性消减杂交技术的原理 | 第23-24页 |
| ·抑制性消减杂交技术的流程 | 第24-26页 |
| ·抑制性消减杂交技术在棉花差异表达基因研究中的应用 | 第26-27页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-48页 |
| ·植物材料 | 第28-29页 |
| ·高比强度品系69307的选育 | 第28页 |
| ·材料种植 | 第28页 |
| ·取材 | 第28-29页 |
| ·棉纤维总RNA提取及质量检测 | 第29-30页 |
| ·准备工作 | 第29页 |
| ·总RNA提取 | 第29-30页 |
| ·总RNA质量检测 | 第30页 |
| ·SMATer cDNA合成 | 第30-33页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第30-31页 |
| ·LD PCR扩增cDNA | 第31-32页 |
| ·双链cDNA柱层析纯化 | 第32-33页 |
| ·抑制性消减杂交 | 第33-39页 |
| ·RsaⅠ酶切 | 第33页 |
| ·酶切产物纯化 | 第33-34页 |
| ·接头连接 | 第34-35页 |
| ·接头连接效率检测 | 第35-36页 |
| ·第一轮杂交 | 第36页 |
| ·第二轮杂交 | 第36-37页 |
| ·第一轮PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·第二轮(巢氏)PCR扩增 | 第38页 |
| ·消减效率检测 | 第38-39页 |
| ·H20正向消减文库的构建及初步筛选 | 第39-41页 |
| ·二次PCR产物纯化 | 第39-40页 |
| ·文库构建 | 第40页 |
| ·菌落PCR检测 | 第40-41页 |
| ·反向Northern筛选差异表达克隆 | 第41-43页 |
| ·杂交探针制备 | 第41-42页 |
| ·cDNA微阵列膜的制备 | 第42页 |
| ·杂交检测 | 第42-43页 |
| ·差异表达克隆测序及生物信息学分析 | 第43页 |
| ·差异表达克隆测序 | 第43页 |
| ·生物信息学分析 | 第43页 |
| ·荧光定量PCR | 第43-46页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第43-44页 |
| ·引物设计 | 第44-45页 |
| ·荧光定量PCR反应体系和程序 | 第45-46页 |
| ·EST-SSR分子标记 | 第46-48页 |
| ·EST-SSR分子标记的开发 | 第46页 |
| ·棉花基因组DNA的提取 | 第46-47页 |
| ·SSR标记多态性检测 | 第47-48页 |
| ·连锁图谱的构建 | 第48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-64页 |
| ·总RNA提取 | 第48-49页 |
| ·双链cDNA合成质量检测 | 第49-50页 |
| ·Rsa Ⅰ酶切效率检测 | 第50-51页 |
| ·接头连接效率检测 | 第51-52页 |
| ·巢氏PCR产物分析 | 第52页 |
| ·消减效率分析 | 第52-53页 |
| ·消减文库构建 | 第53页 |
| ·菌落PCR检测插入片段大小 | 第53-54页 |
| ·反向Northern筛选差异表达克隆 | 第54-55页 |
| ·差异表达克隆的测序及生物信息学分析 | 第55-58页 |
| ·差异表达克隆的测序 | 第55页 |
| ·差异表达序列的同源比对分析 | 第55-57页 |
| ·差异表达序列的GO功能分类及KEGG代谢途径分析 | 第57-58页 |
| ·qRT-PCR分析差异表达基因的时空表达特征 | 第58-62页 |
| ·EST-SSR标记开发、检测及染色体定位 | 第62-64页 |
| ·EST-SSR标记开发 | 第62-63页 |
| ·EST-SSR标记多态性检测及染色体定位 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-72页 |
| ·高质量棉纤维总RNA的提取 | 第64-65页 |
| ·SSH技术构建消减文库 | 第65-66页 |
| ·棉纤维次生壁加厚期与伸长期相比较的代谢变化 | 第66页 |
| ·纤维次生壁加厚期的差异表达基因 | 第66-70页 |
| ·水通道蛋白 | 第67页 |
| ·类成束蛋白阿拉伯半乳糖蛋白 | 第67-68页 |
| ·类受体蛋白激酶 | 第68-69页 |
| ·果胶甲酯酶 | 第69-70页 |
| ·其他差异表达基因 | 第70页 |
| ·EST-SSR分子标记的开发与应用 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 附录1 | 第80-83页 |
| 附录2 | 第83-84页 |
| 作者简介 | 第84页 |